细胞生物学实验-细胞骨架的观察ppt课件.ppt

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1、实验四细胞骨架的观察细胞生物学实验细胞骨架的观察实验目的实验原理仪器、材料与试剂实验步骤实验报告及思考题实验目的掌握用考马斯亮蓝R250染色观察动物和植物细胞微丝的方法。细胞骨架的观察实验原理细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament，MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediatedfilament，IF）。细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅仅是活细胞的支撑结构，决定细胞的形状，而且与

2、细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切相关。细胞骨架的观察仪器、材料与试剂仪器：光学显微镜，温箱，细胞培养设备材料：平皿，烧杯，载玻片（为区别细胞的正反面，剪掉一角），体外培养的贴壁生长细胞、植物、镊子试剂：磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH7.4），.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8），M-缓冲液，1％TritonX-100（用M-缓冲液配），0.2%考马斯亮蓝R250，3.0%戊二醛（用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制）细胞骨架的观察实验步骤细胞骨架的观察A动物细胞的微丝观察1）将细胞培养在盖玻片上，未致密时即可使用。取出盖玻片

3、，用PBS洗3次。2）室温下用1%TritonX-100处理20-30min。3）用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。4）略晾干后，用3.0%戊二醛固定细胞10min。5）用PBS洗数次，滤纸吸干。6）用0.2%考马斯亮蓝R250染片子30min。蒸馏水冲洗，在空气中自然晾干。7）在光学显微镜下先用10×物镜再用40×物镜观察。实验步骤B植物细胞的微丝观察1）去植物茎表皮约1cm2，放入盛有0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（pH6.8）的小烧杯中。2）吸去缓冲液，用1%TritonX-100处理洋葱表皮25-40min。3）除去TritonX-100，用M-缓冲液充分洗3次，每次约10min。

4、4）加3.0%戊二醛固定40min。5）用PBS洗3次，滤纸吸去残留液体。6）0.2%考马斯亮蓝R250染色30min。7）用蒸馏水洗数遍，降低背景。8）将样品置于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察。细胞骨架的观察实验报告及思考题1画出所观察到的微丝图像。2说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？3说明M-缓冲液的作用是什么？4考马斯R250和G250的区别是什么？5考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有什么区别，各有什么优缺点？6简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。7ATP在微丝动态平衡中所起的作用是什么？细胞骨架的观察