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时间:2018-08-01
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1、YB1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响作者:杨靖许文林李娟弓晋灵吴晓君陈巧云王法春【摘要】 目的:观察Y盒结合蛋白1(YB1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB1shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RTPCR和蛋白质印迹方法检测MCF7细胞中YB1mRNA和YB1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RTPCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP2蛋白的活性。结果:稳定
2、转染YB1shRNA的细胞中YB1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB1shRNA可以沉默乳腺癌MCF7细胞中YB1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP2的表达及活性。【关键词】Y盒结合蛋白1;MCF7;shRNA;迁移和侵袭能力;MMP2 [Abstract]Objective:TostudytheeffectsofYbox13bindingprotein1(YB1)ontheinvasiveness
3、andmigrationcapabilityofbreastcancercells.Methods:TherecombinanteukaryoticexpressionplasmidincludingYB1shRNAwasintroducedintoMCF7cellsbylipofectaminemediationandthecelllinewithstableexpressionofYB1wasobtainedbyG418screeningandcolonyculture.TheexpressionlevelsofYB1mRNAandproteinweredetermin
4、edbyRTPCRandWesternblotting.Themobility,invasivenessandmigrationcapabilityofcellswereevaluatedbyusingwoundhealingassayandTranswellchambermodelinvitrowhiletheexpressionlevelsofMMP2mRNAandproteinweredeterminedbyRTPCRandWesternblotting,andtheactivityofMMP2proteinwasdetectedbyGelatinZymography
5、.Results:TheexpressionofYB1inthecellstransfectedwithYB1shRNAwasmuchlessthanthecellstransfectedwithrandomfragmentandthecontrolgroup.Themobility,invasiveness,migrationcapabilityandtheexpressionofMMP2aswellastheactivityofMMP2proteinofthecellstransfectedwithYB1shRNAweremuchlowerthantheothertw
6、ogroupswhilethedifferencesbetweentheothertwogroupswerenotsignificant.Conclusion:TheinterferenceofYB1withYB1shRNAinbreastcancerMCF7cellscansuppresstheexpressionofYB1andtheinvasivenessandmigration13capabilityofcells,anddecreasetheexpressionofMMP2andtheactivityofMMP2protein. [Keywords]Ybox
7、bindingprotein1;MCF7;shRNA;invasivenessandmigrationcapability;MMP2 Y盒结合蛋白1(Yboxbindingprotein1,YB1)是Y盒蛋白家族成员之一,广泛分布于原核与真核生物,它参与多种生命活动过程,研究发现YB1与人类恶性肿瘤关系非常密切,在部分类型的肿瘤中表达量偏高,已证实YB1异常表达的肿瘤类型有前列腺癌、乳腺癌、肺癌等[1],尤其在前列腺癌[2]和乳腺癌[3]中,YB
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