临床医学毕业论文yb1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响.doc

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1、毕业论文YB1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响名：2014年6月25日YB1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响作者：杨靖许文林李娟弓晋灵吴晓君陈巧云王法春【摘要】目的：观察Y盒结合蛋白1(YB1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法：通过脂质体介导的方法将YB1shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF7细胞，经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RTPCR和蛋白质印迹方法检测MCF7细胞中YB1mRNA和YB1蛋白的表达水平，运用划痕实验和Transwcll小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化，同时运用RTPCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP2

2、的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP2蛋白的活性。结果：稳定转染YB1shRNA的细胞中YB1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞，且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB1shRNA可以沉默乳腺癌MCF7细胞中YB1的表达，并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP2的表达及活性。【关键词】Y盒结合蛋白1;MCF7;shRNA;迁移和侵袭能力;MMP2[Abstract]Objective:TostudytheeffectsofYboxbindingprotein1(Y

3、B1)ontheinvasivenessandmigrationcapabilityofbreastcancercells.Methods：TherecombinanteukaryoticexpressionplasmidincludingYB1shRNAwasintroducedintoMCF7cellsbylipofcctamincmediationandthecelllinewithstableexpressionofYB1wasobtainedbyG418screeningandcolonyculture.TheexpressionlevelsofYB1mR

4、NAandproteinweredeterminedbyRTPCRandWesternblotting.Themobility,invasivenessandmigrationcapabilityofcellswereevaluatedbyusingwoundhealingassayandTranswellchambermodelinvitrowhiletheexpressionlevelsofMMP2mRNAandproteinweredeterminedbyRTPCRandWesternblotting,andtheactivityofMMP2proteinwa

5、sdetectedbyGelatinZymography.Results:TheexpressionofYB1inthecellstransfectedwithYB1shRNAwasmuchlessthanthecellstransfectedwithrandomfragmentandthecontrolgroup.Themobility,invasiveness,migrationcapabilityandtheexpressionofMMP2aswellastheactivityofMMP2proteinofthecellstransfectedwithYB1s

6、hRNAweremuchlowerthantheothertwogroupswhilethedifferencesbetweentheothertwogroupswerenotsignificant.Conclusion:TheinterferenceofYB1withYB1shRNAinbreastcancerMCF7cellscansuppresstheexpressionofYB1andtheinvasivenessandmigrationcapabilityofcells,anddecreasetheexpressionofMMP2andtheactivit

7、yofMMP2protein.［Keywords］Yboxbindingprotein1;MCF7;shRNA;invasivcncssandmigrationcapability;MMP2Y盒结合蛋白1(Yboxbindingprotein1,YB1)是Y盒蛋白家族成员之一，广泛分布于原核与真核生物，它参与多种生命活动过程，研究发现YB1与人类恶性肿瘤关系非常密切，在部分类型的肿瘤中表达量偏高，已证实YB1异常表达的肿瘤类型有前列腺癌、乳腺癌、肺癌等［1］,尤其在前列腺癌［2］和乳腺癌［3］中，YB1的表达量随病情恶化而增加，这些证据表明YB1与这些恶性肿瘤的