HPLC法测定镇咳宁颗粒中白花前胡甲素的含量.doc

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1、HPLC法测定镇咳宁颗粒中白花前胡甲素的含量作者：汪保国陈思东周卫平原素林雪颖【摘要】目的建立复方制剂镇咳宁颗粒中白花前胡甲素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法采用phenomenexlunaC18色谱柱，乙腈－水梯度洗脱；检测波长：321nm；柱温：26℃。结果白花前胡甲素在0.185ug～3.7ug范围内线性关系良好，r＝1；回收率99.62％，RSD为0.37％。结论本测定方法简便可行、重复性好，可用于本制剂中的质量控制。【关键词】镇咳宁颗粒白花前胡甲素含量测定镇咳宁颗粒由前胡、紫菀、枳壳等多味中药组成，具散风清热，

2、化痰止咳之功。用于治疗风热咳嗽，痰多，喘满等症状。前胡为方中君药，具有散风清热、降气化痰等功效，其主要含有多种类型的香豆素及其糖苷[1]，文献报道白花前胡甲素是前胡药材的代表性成分[2－4]。本方参照药典［5］选用白花前胡甲素作为指标成分，采用HPLC法测定白花前胡甲素的含量。1仪器与试药Aiglent1100高效液相色谱仪(美国Aiglent公司，配有自动进样器，柱温箱，二级管陈列检测器（DAD），四元（型号）泵，Aiglent-Chemstation化学工作站。镇咳宁颗粒(批号：20080115、20080116、2008

3、0117)，由广州中医药大学新药开发研究中心提供；阴性对照样品(自制)；白花前胡甲素(供含量测定用，110753-200413)，由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，液相用水为超纯水，其余试剂为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件phenomenexlunaC18(250mm×4.6mm,5um)为固定相；流动相乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表进行梯度洗脱(表1)；流速：1mL／min；检测波长为321nm；柱温：26℃；进样量：10uL。在该色谱条件下，白花前胡甲素峰可达基线分离，其它药材成分对测定无干扰，结果见图

4、1。表1流动相梯度洗脱时间表白花前胡甲素对照品复方供试品缺前胡阴性对照图1HPLC色谱图2.2对照品溶液的制备精密称取白花前胡甲素对照品适量，加甲醇溶解定容，制成浓度为0.185mg/mL的白花前胡甲素对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取样品适量，研细，取细粉0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入80%乙醇50ml,称定重量,超声处理（250W，40kHz）30分钟,放冷，再称定重量,用80%乙醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜滤过,取续滤液，作为供试品溶液。2.4线性关系考察3分别精密吸取对照品溶液1,2,4，8,l0,

5、l2,16,20uL进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样质量(X，ug)对峰面积(Y，mAu．Sec)进行线性回归，求得回归方程为：Y=1095.7X-1.4585，r=1，线性范围0.185ug～3.7ug。（见表2）表2白花前胡甲素标准曲线的测定2.5精密度试验精密吸取对照品溶液10uL，连续进样6次，测得峰面积积分值。白花前胡甲素平均峰面积为2031.53，RSD为1.28％。结果表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10uL，于0，2，4，8，12h进样测定。白花前胡甲素平均峰面积为

6、1052.07，RSD为2.15％。表明供试品溶液在12h内稳定。2.7重复性试验取同一批次样品(20080115)，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定含量，结果白花前胡甲素平均含量为0.8012mg/g，RSD为1.57%。结果表明本方法重复性良好。2.8加样回收率试验同一批次已知含量的镇咳宁颗粒(20080115)适量，研细，取细粉约0.5g，精密称定，精密加入一定量的白花前胡甲素对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作6份，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，结果见表3。结果表明该方法具有良好的

7、回收率。表3加样回收试验结果（n＝6）2.9样品测定精密称取镇咳宁颗粒0.5g，按样品制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪中，测定含量。共测定3批，结果见表4。表4镇咳宁颗粒含量测定结果（n＝3）3讨论3.1供试品溶液制备方法曾考察提取方法(超声、回流)、提取溶剂（50％乙醇、80％乙醇、甲醇）、提取溶媒量(50倍量、100倍量、200倍量)、提取时间(15min、30min、45min)。加热回流与超声处理样品，两者提取的白花前胡甲素含量相差不大，从操作简便角度考虑，确定提取方法为超声提取；三种不同溶媒进

8、行提取，白花前胡甲素含量无差异。80%乙醇提取液更为澄清，容易滤过，因此提取溶媒选用80%乙醇；溶媒用量为100倍量和200倍量时提取效果差异不大，均高于50倍量时的提取效果，因此选择溶媒用量为100倍量。超声处理30min与45min结果近似，略高于超声处理15min，因此