核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

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1、三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAEBuffer(pH8.5)组份浓度2MTris-醋酸，100mMEDTA配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris242gNa2EDTA·2H2O37.2g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加入57.1ml的乙酸，充分搅拌。4.加去离子水将溶液定容至lL后，室温保存。10×TBEBuffer(pH8.3)组份浓度890mMTris-硼酸，20mMEDTA配制量1L配制方法l.称量下列试剂，置于lL烧杯中。Tris108gNa2EDTA·2H2O7.44

2、g硼酸55g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至lL后，室温保存。10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200rnMMOPS，20mMNaOAc，10mMEDTA配制量1L配制方法1.称41.8gMOPS，置于1L烧杯中。2.加约700mlDEPC处理水，搅拌溶解。3.使用2NNaOH调节pH值至7.0。4.再向溶液中加入下列试剂。1MNaOAc(DEPC处理)20ml0.5MEDTA(pH8.0)(DEPC处理)20ml5.用DEPC处理水将溶液定容至1L。6.用0.45m滤膜过滤

3、除去杂质。7.室温避光保存。注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。溴乙锭(10mg/ml)组份浓度10mg/ml溴乙锭配制量100ml配制方法1.称量1g溴乙锭，加入到100ml容器中。2.加入去离子水100ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。4.溴乙锭的工作浓度为0.5g/ml。注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。Agarose凝胶配制方法1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶

4、中。3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。5.使溶液冷却至60℃左右，如需要

5、可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5µg/ml)。并充分混匀。注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3~5min之间。7.在室温下使胶凝固(大约30min~1h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2~5天。琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖浓度最佳线形DNA分辨范围(bp)0.5%0.7%1.0%1.2%1.5%2.0%1,000~30,000800~12,000500~10

6、,000400~7,000200~3,00050~2,0006×LoadingBuffer(DNA电泳用)组份浓度30mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)XyleneCyanolFF0.05%(W/V)BromophenolBlue配制量500ml配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。EDTA4.4gBromophenolBlue250mgXyleneCyanolFF250mg2.向烧杯中加入约200ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。3.加入180ml的甘油(Glycerol)后，使用2NNaOH调节p

7、H值至7.0。4.用去离子水定容至500ml后，室温保存。10×LoadlngBuffer(RNA电泳用)组份浓度10mMEDTA50%(V/V)Glycerol0.25%(W/V)XyleneCyanolFF0.25%(W/V)BromophenolBlue配制置10ml配制方法1.称量下列试剂，置于10ml离心管中。0.5MEDTA(pH8.0)200µlBromophenolBlue25mgXyleneCyanolFF25mg2.向离心管中加入约4ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。3.加入5ml的甘油(Glycerol)后，充分混匀

8、。4.用DEPC处理水定容至10ml后，室温保存。四、核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20×SSC组份浓度3.0MNaCl，0.3MNa3citrate