DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制.doc

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1、DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制2MTris-HAc100mMEDTApH＝8.5配制量：配制方法：1L1.称取Tris碱242.3g，置于烧杯中2.再称取EDTA固体29.3g或Na2EDTA·2H2O固体37.2g3.加入约700mlddH2O，溶解完全4.加入57ml的HAc，充分搅拌5.用HAc调pH至8.56.定容至1L，室温保存50×TAE缓冲液pH8.5配方：890mMTris-H3BO320mMEDTApH＝8.3配制量：配制方法：1L1.称取Tris碱53.88g，EDTA固体2.93g或Na2EDTA·2H2O固体3.72g，H3B

2、O327.5g置于烧杯中2.加入约700ml的ddH2O，溶解完全3.调pH至8.34.定容至1L，室温保存5×TBE缓冲液pH8.3配方：10mg/mlEB配制量：配制方法：100ml1.称取1gEB固体于专用容器中2.加入100ml的ddH2O，搅拌数小时至溶解完全3.转移至棕色瓶中，4℃避光保存注意：EB为强致癌物质，专用容器小心操作EB溴化乙锭配方：30mMEDTA36%(V/V)丙三醇0.05％(W/V)溴酚蓝pH＝7.0配制量：配制方法：100ml1.用移液器吸取6mlEDTA(500mM，pH8.0)加入约50mlddH2O中2.再吸取5

3、ml1%的溴酚蓝3.量取36ml丙三醇4.用2NNaoH调pH至7.05.定容至100ml，4℃保存6×上样缓冲液LoadingBuffer配方：10mMEDTA50%(V/V)丙三醇0.25%(W/V)溴酚蓝配制量：配制方法：100ml1.用移液器吸取2mlEDTA(500mM，pH8.0)加入约40mlddH2O中2.再称取250mg的溴酚蓝3.量取50ml丙三醇4.定容至100ml，4℃保存10×上样缓冲液LoadingBuffer配方：1%(W/V)溴酚蓝配制量：配制方法：100ml1.称取1g溴酚蓝置于烧杯中2.加入约80ml的ddH2O，溶

4、解完全3.定容至100ml4.转移至棕色容器中5.避光，4℃保存1%(W/V)溴酚蓝配方：10%(W/V)AP配制量：配制方法：50ml1.称取5g过硫酸铵置于烧杯中2.加入ddH2O定容至50ml3.分装于1.5ml离心管中4.-20℃保存10%(W/V)过硫酸铵配方：29.0%(W/V)Acr1.0%(W/V)Bis配制量：配制方法：1L1.称取丙烯酰胺固体290g置于专用的烧杯中2.再称取10g甲叉双丙烯酰胺3.加入约500mlddH2O，充分搅拌，溶解完全后定容至1L4.用0.45um滤纸过滤除杂5.转移棕色瓶中，4℃避光保存注意：丙烯酰胺有毒

5、，需小心操作，专用容器配制30%(W/V)丙烯酰胺储液(DNA用)配方：1.  0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml蒸馏水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na2·2H2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH调解pH值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后定容至1L。高压灭菌。2. 5X TBE:Tris碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5MEDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1XTBE:5X TBE缓冲液与蒸馏水按1:4稀释就OK。配置方法方法1：

6、1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。方法2：0.05%的溴酚蓝配westernblot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计

7、影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。方法3：1％溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。相关词条甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠Western上样缓冲液配制整理●6×SDS样品缓冲液4×Tris·Cl/SDS,PH6.8(0.28mol/L)7ml甘油[30%(V/V)]3.0ml（3.8g）甘油密度为1.2613g/cm3(20/4℃)SDS[1%（m/V）]1g溴酚蓝[0.0012%(m/V)]1.2mgDTT(0.5mol/L)0.93g如果需要，加去离子蒸馏水至10ml；等量分装成0.

8、5ml并于-70℃贮存●8×Tris·Cl/SDS,PH6.8Tris-base（0.5mol