蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法.pdf

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1、精品文档蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法20%（W/V）Glucose配制量100ml配制方法:1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.高温高压灭菌后，4℃保存。0.5MEDTA（pH8.0）配制量1L配制方法:1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。注意：p

2、H值至8.0时，EDTA才能完全溶解。1MDTT配制量50ml配制方法:1.称取7.71gDTT，加入到100ml烧杯中。1欢迎下载。精品文档2.加50ml的0.01MNaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况0.22um滤膜过滤除菌。3.适量分成小份后，-20℃保存。30%丙烯酰胺（29：1）配制量1L配制方法:1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。Acrylamide290gBisacrylamide10g2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1L，用0.45um滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4℃保存。注意：

3、丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液组份浓度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%（W/V）SDS配制量1L配制方法：1．称量下列试剂，置于1L烧杯中。2．取下列溶液，加入烧杯中。2欢迎下载。精品文档Tris15.1gGlycine94gSDS5g3.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。4×SDS-蛋白上样缓冲液组份浓度Tris-HCl（pH6.8

4、）200mMSDS8%溴酚蓝0.4%甘油40%巯基乙醇4%配制量10ml配制方法：1.量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中。Tris-HCl（pH6.8）2mlSDS0.8溴酚蓝40mg甘油4ml2.加去离子水溶解后定容至10ml。3.小份（500ml/份）分装后，于室温保存。4.使用前将20ul的β-巯基乙醇加到每小份中。3欢迎下载。精品文档注意：加入β-巯基乙醇的上样缓冲液可在室温下保存一个月左右。此缓冲液可以用DTT替代β-巯基乙醇。10ml上样缓冲液中加入0.617mgDTT,溶解后分分装，可-20℃保存一年。使用时30ul样品加入10u

5、lLoadingBuffer混匀，沸水浴5-10分钟，冷却却可上样。电转缓冲液（western转膜用）组份浓度0.25MTris,2.5MGlycine,0.37%SDS配制量1L配制方法：1.称量下列试剂，置于15ml离心管中。Tris3.0gGlycine14.4g10%SDS3.7ml2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至800ml后，加入200ml的甲醇。4.室温保存。注意：对于本公司所产10×电转缓冲液（D1060），使用时，取100ml10×电转缓冲液，加入700ml去离子水,加入200ml甲醇

6、，混匀即可。TBST缓冲液（western洗膜用）组份浓度20mMTris-HCl,150mMNaCl0.05%（V/V）Tween204欢迎下载。精品文档配制量1L配制方法：1.称量下列试剂，置于1L离心管中。NaCl8.8g1MTris-HCl（pH7.6）20ml2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加入0.5-1.0mlTween20后充分混匀。4.加去离子水将溶液定容至1L后，4℃保存。常规SDS聚丙烯酰胺凝胶配制方法试剂分离胶8%分离胶10%分离胶12%浓缩胶4%配制量10ml10ml10ml5ml30%丙烯酰胺2.

7、67ml3.33ml4.0ml0.67ml1.5mol/LTris（pH8.8）2.5ml2.5ml2.5ml-1.0mol/LTris（pH6.8）---0.625ml10%SDS100ul100ul100ul50ulddH2O4.6ml4.0ml3.3ml3.6mlTEMED10ul10ul10ul5ul10%过硫酸氨100ul100ul100ul50ul注意：TEMED和10%过硫酸氨最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸氨在4℃有效期为一周，TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温

8、箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1mlddH2O封上层，胶凝5欢迎下载。精品文档固后可见到分界线。灌浓缩胶时，先倾去水层，再