牛奶中酪蛋白和乳糖的分离

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1、牛奶中酪蛋白和乳糖的分离一、原理牛奶是一种乳状液,主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖等组成。牛奶蛋白分为四种：β-乳球蛋白、γ-乳清蛋白、乳清蛋白和酪蛋白。其中酪蛋白对牛奶蛋白的贡献最大，占了80%，含有１０％的磷，对促进大脑发育起至关重要的作用；乳清蛋白分子比较小，相对酪蛋白更加易消化；而乳球蛋白多是牛奶中的生物活性物质，如免疫球蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶 等。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4.8)时,蛋白质所带正、负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解度最小,会从牛奶中沉淀出来,以此分离酪

2、蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。　乳糖是一种二糖,由一分子β-D-半乳糖的半缩醛羟基与另一分子葡萄糖C4上的醇性羟基缩去一分子水通过β-1，4糖苷键结合而成。乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混入乳糖水溶液中,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。二、实验材料和试剂   脱脂乳或脱脂奶粉。   醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH=4.7），95%乙醇，乙醚，碳酸钙粉末，苯肼试剂。三、实验步骤   1.从牛奶中分离酪蛋白   　在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入40ml40℃，PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40ml，用PH精密试纸检验液体的PH值（使牛奶

3、pH=4.8），放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤酪蛋白。(在滤液中加入少量粉状碳酸钙,留作乳糖的分离。)依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白,去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算牛奶中酪蛋白的含量。2.从牛奶中分离乳糖   在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5gCaCO3粉末，搅拌均匀后加热至沸。加CaCO3的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入1～2粒沸石，加热浓缩至3～5ml，加入10ml95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。

4、加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇洗涤产品。   3.乳糖成脎试验   取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%，在试管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼试剂①，摇匀，试管口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇，加热10～15分钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形态，可证实为乳糖。①苯阱试剂有毒，小心使用，勿触及皮肤，如触及皮肤先用稀醋酸洗，再用水洗。四、实验注意事项　　①酪蛋白等电点随温度不同而变化,等电点pH为4.6～4.8。分离酪蛋白时,边加醋酸,边搅拌,边测pH,同时观察沉淀。开始快搅拌,接近等电点时,应慢搅拌。　　

5、②酪蛋白沉淀用200目的尼龙布过滤比较好,同时进行抽滤。用滤纸很难过滤;而用纱布过滤,酪蛋白容易粘在其上。　　③用乙醇和乙醚清洗酪蛋白沉淀时,应将酪蛋白捣碎,并在溶剂中搅拌、浸泡,充分洗净脂肪。纯净的酪蛋白应为白色,若发黄表明脂肪未洗干净。