高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用

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1、高糖诱导人肾间质成纤维细胞c?met的表达及黄芪对其的调节作用【摘要】　　目的：体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞c?met表达的影响，并观察黄芪药物血清对其的调节作用。　　方法：体外培养人肾脏间质成纤维细胞，按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h，采用逆转录?聚合酶链反应方法检测c?met和转化生长因子β1（transforminggroRNA表达，蛋白印迹分析检测c?met蛋白的表达。制备含药血清，将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10%黄芪含药血清组，作用24h和48h后，检测c

2、?met蛋白和mRNA表达情况。　　结果：与正常对照组比较，高糖组细胞培养12h时c?metmRNA表达增加（P<0.05），24h达高峰（P<0.01），之后表达逐渐下降；高糖组细胞培养24h时，TGF?β1的表达开始增加（P<0.05），96h达到高峰（P<0.01）。与高糖组以及对照血清组比较，黄芪含药血清可使细胞c?metmRNA和蛋白表达增加（P<0.01,P<0.05）。　　结论：高糖刺激早期诱导c?met表达，之后表达下降。黄芪可以通过诱导c?met表达延缓糖尿病肾病的进展。【关

3、键词】原癌基因蛋白质c?met;糖尿病肾病;黄芪;成纤维细胞;转化生长因子β1　　Methods:Acellculturesystemofhumankidneyfibroblastsankidneyfibroblastsalcontrolgroup,highglucosegroupandmannitolgroup.Expressionsofc?metandtransforminggroRNAserasechainreaction(RT?PCR)andtheexpressionsofc?metproteinethodafter6?

4、,12?,24?,48?and96?hourculture.Thehumankidneyfibroblasts;theexpressionsofc?metmRNAandproteinalcontrolgroup,expressionofc?metmRNAinthehighglucosegroupRNAalcontrolgroupafter24?hourculture(P<0.05),arrivingatthepeakafter96?hourculture(P<0.01).Forty?eighthoursaftertr

5、eating,thelevelsofc?metmRNAandproteininfibroblastsetmRNAandproteininearlierperiod,andtheninhibittheexpressions.RadixAstragalicanup?regulatetheexpressionsofc?metmRNAandproteinofhumankidneyfibroblasts,aybeoneofitsactionmechanismsindelayingtheprogressionofdiabeticnephro

6、pathy.　　Keyet;diabeticnephropathy;RadixAstragali;fibroblasts;transforminggroet是具有酪氨酸激酶活性的受体，与其相结合的配体是肝细胞生长因子（hepatocytegroet在器官发育的早期起着重要作用［1］，并可以介导HGF的所有反应。研究发现糖尿病大鼠肾脏髓质有c?met表达［2］，提示c?met与糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）存在相关性。然而c?met参与DN发病的具体机制国内外尚未见有报道。因此本研究以DN主要靶细胞——

7、肾脏间质成纤维细胞为研究对象，探讨c?met在肾间质细胞中活性的改变，及黄芪对其表达的影响，为临床治疗寻求理论依据。　　1材料与方法　　1.1主要药品和试剂TRIzol（Gibco公司）、莫洛尼氏鼠白血病病毒（Moloney?murineleukemiavirus,M?MLV）逆转录酶（reversetranscriptase,RT）（Gibco公司）、TaqDNA聚合酶（Promega公司）和羊抗人c?met多克隆抗体（RD公司）。黄芪注射液（上海福达制药有限公司，2ml/支，含黄芪皂苷成分4mg，相当于生药4g）、甘露醇（S

8、igma公司，生产批号为M?4125）和葡萄糖（FisherScientific公司，生产批号为053037）。　　1.2实验方法　　1.2.1含药血清制备选体质量200g雄性SD大鼠2只，灌胃前禁食12h，1只予黄芪注射液［按黄芪皂苷2.4mg/(kg·d)计