纤维素酶法提取黄芪总黄酮的工艺研究论文

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1、纤维素酶法提取黄芪总黄酮的工艺研究论文贲永光，丘泰球，李坤平，孙爱群【摘要】目的优选黄芪总黄酮的提取工艺。方法用正交设计法探讨了影响纤维素酶法提取黄芪中总黄酮的主要因素,并确定了最佳提取工艺。结果纤维素酶法提取黄芪总黄酮的最佳工艺条件为:酶解时间为120min，酶解温度为30℃，酶量为8mg，pH值为4.5。结论此工艺简单可行,是一条提取黄芪总黄酮类物质的有效途径。【关键词】纤维素酶黄芪总黄酮正交设计法Abstract：ObjectiveToopmtimizetheextractiontechnicsfortotalflavonoidsfromAstragalus.MethodsThe

2、orthogonaldesignaincelluloseenzymaticextractionoftotalflavonoidsfromAstragalusandthebestextractiontechnicsined.ResultsTheoptimumconditionscelluloseenzymaticextractionoftotalflavonoidsfromAstragalusolysistime120min,hydrolysistemperature30℃,enzymevolume8mg,PHvalue4.5.ConclusionThismethodissimplean

3、dfeasible.ItisaneffectiveAstragalis.Keyembranaceus的干燥根,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌等功效。黄芪中的主要有效成分为多糖、皂苷和黄酮类化合物,其中黄酮类化合物主要包括毛蕊异黄酮(calycosin)及其糖苷芒柄花素(formonoin)和芒柄花苷(ononion)等［1］。研究证实黄芪中的黄酮类成分具有多种药理活性,具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、增强免疫力、抗病毒以及促进细胞增殖的作用［2～3］。近年来，酶技术应用于中草药有效成分的分离提取取得了不少新的成果.freelg)由上海伯奥生物科技有限公司提供。2方法与结果2.

4、1黄芪总黄酮成分提取称取纤维素酶8mg，用pH=4.5的HAc-NaAc缓冲液10ml混合后与1g黄芪粉末（过50目筛）混合均匀，在30℃下处理1h后加95％的乙醇20ml，在70℃下浸提1h过滤，用20ml体积分数85％的乙醇洗涤残渣过滤，合并滤液，回收乙醇，残渣溶于质量分数为85%的乙醇，定容至25ml，精密吸取1ml于25ml的容量瓶中，30%乙醇定容,得供试品溶液。2.2黄芪总黄酮含量的测定2.2.1芦丁对照品溶液的制备准确称取于芦丁对照品10mg,置于50ml容量瓶中,加30%的乙醇30ml,.freell的芦丁对照品溶液,冷藏,备用。2.2.2吸收波长的选择对照品测定波长的

5、确定：取对照品溶液1ml，按标准曲线项下的方法进行，在400～700nm波长范围内扫描，结果在500nm波长处为最大吸收。样品测定波长的确定：取样品的乙醇提取液1ml，按标准曲线项下的方法进行，在400～700nm波长范围内扫描，结果在500nm波长处有最大吸收。2.2.3标准曲线制备精密称取芦丁对照品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分别至25ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加入10%硝酸铝溶液0.3ml，放置6min，加入1mol氢氧化钠溶液4ml，分别用30%的乙醇定容，放置15min，置比色皿中，在500nm波长处测定吸光度

6、。以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线。经回归统计，得标准曲线方程：A=0.0109C-0.0013，r=0.9998。浓度在0～400μg/ml范围内与吸光值线性关系良好。2.3黄芪中总黄酮提取率的测定取黄芪中总黄酮提取液用紫外分光光度计于500nm下测出吸光度A代入以下回归方程式及下列公式，计算出黄芪中总黄酮的提取率。提取率（%）=（C×V×10-6）l），l）。2.4单因素实验及正交实验酶法提取的整个工艺分为酶解和浸提两部分，准确称取黄芪1g，加入缓冲溶液和一定比例的酶，黄芪经酶解后在相同的条件下浸提，过滤，按标准曲线方法测定吸光度。2.4.1考察酶解温度对总黄酮提取

7、率的影响称取纤维素酶8mg，用pH=4.5的HAc-NaAc缓冲液10ml混合后与1g黄芪粉末（过50目筛）混合均匀，分别在30，35，40，45，50，55℃下处理1h后加95％的乙醇20ml，在70℃下浸提1h过滤，用20ml体积分数85％的乙醇洗涤残渣过滤，合并滤液，回收乙醇，残渣溶于质量分数为85%的乙醇，定容至25ml，精密吸取1ml于25ml的容量瓶中，30%乙醇定容，按标准曲线操作测定总黄酮含量。绘制单因素图见图1。由于一般纤维素