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时间:2018-07-10
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1、鼻疗法喷剂对偏头痛大鼠模型5-HT、NO、多巴胺含量影响【摘要】目的观察鼻疗法喷剂对偏头痛大鼠模型5-HT、NO、多巴胺含量的影响,探讨其神经生物学作用机制。方法大鼠随机分成6组:正常对照组、模型对照组、阳性药物组、鼻疗法喷剂大、中、小剂量组;除空白对照组以外的其他5组SD大鼠皮下注射硝酸甘油注射液10mg/kg进行造模;造模后,阳性药物组每天灌胃天舒胶囊溶液1ml/100g;鼻疗法喷剂高、中、低剂量组分别每天滴0.1ml/100g、0.05ml/100g、0.025ml/100g体质量;正常对照组每
2、天灌胃生理盐水1ml/100g体质量,连续4d。末次给药1h后,采血测定血中的5-HT、多巴胺含量,取脑测定下丘脑、脑干含量。结果鼻疗法喷剂组特别是大剂量组血清中5-HT与多巴胺含量、下丘脑和脑干中NO含量皆显著低于正常对照组。结论鼻疗法喷剂能有效降低血清中5-HT、多巴胺含量,降低下丘脑、脑干的NO含量,是鼻疗法喷剂的作用机制之一。�【关键词】鼻疗法;偏头痛;5-HT;NO;多巴胺7偏头痛是常见多发病,有多种发病机制,其中神经递质异常、血管源学说和炎性学说占有重要地位。针对这些发病机制的治疗药物显示
3、了相应的疗效,但许多药物具有较大的毒副作用。积极研究寻找治疗偏头痛的药物,仍然是当今的重要课题[1-2]。鼻疗法喷剂是治疗偏头痛的经验方,有必要探讨其疗效与治疗作用机制。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物SD系大鼠,体质量(200±20)g,雌雄各半,由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供,合格证号:SCXK(沪)2007-0005。1.1.2实验药物鼻疗法喷剂为治疗偏头痛经验方,由本院制剂室制备;天舒胶囊,每粒0.34g,临用前用蒸馏水配成3.74g/100ml,由江苏康缘药业股份有限公司生
4、产,批准文号:国药准字Z10950004,生产批号:070510;硝酸甘油注射液,每支5mg/1ml:,由北京益民药业有限公司提供,批准文号:国药准字H11020289,生产批号:20070111。1.1.3试剂5-HTELISA试剂盒:美国ADL,生产批号:RT110371;多巴胺ELISA试剂盒:美国ADL,生产批号:CA-A011;NO:南京建成生物工程研究所,批号:A014-2。1.2实验方法1.2.1分组取60只SD大鼠随机分成6组,每组雌雄各半。分别为正常对照组,模型对照组,阳性药物组,鼻
5、疗法喷剂大、中、小剂量组。1.2.2造模7除空白对照组以外的其他4组SD大鼠皮下注射硝酸甘油注射液10mg/kg,空白对照组皮下注射生理盐水10mg/kg。1.2.3给药阳性药物组每天灌胃天舒胶囊溶液1次1ml/100g体质量(0.0374g生药/ml,相当于人的等效剂量);大剂量为0.1ml/100g体质量,中、低剂量分别为0.05、�0.025ml�;空白对照组灌以生理盐水1ml/100g体重,连续4d。1.2.4取材末次给药1h后,采血放冰箱保存,并将SD大鼠处死,取脑,分袋装好,放超低温冰箱保
6、存,待测脑中的5-HT,NO,多巴胺含量的变化。1.2.5大鼠血清多巴胺浓度测定①取酶标板,依次对应分别加入100μl的标准品与空白微孔中;②分别标记样品编号,加入100μl样品于空白微孔中;③在标品孔和样品孔中加入50μl酶标记溶液;④(36±2)℃孵育反应60min;⑤洗板机清洗5次,每次静置10~20s;⑥每孔加入底物A、B液各50μl;⑦(36±2)℃避光孵育反应15min;⑧每孔加入终止液,终止反应。1.2.6大鼠血清5-HT测定①取酶标板,依次对应分别加入100μl的标准品与空白微孔中;②
7、分别标记样品编号,加入100μl样品于空白微孔中;③在标品孔和样品孔中加入50μl酶标记溶液;④(36±2)℃孵育反应60min;⑤洗板机清洗5次,每次静置10~207s;⑥每孔加入底物A,B液各50μl;⑦(36±2)℃避光孵育反应15min;⑧每孔加入终止液,终止反应。1.2.7NO的测定按试剂盒要求进行测定。1.2.8统计利用Sigma-plot数据处理软件进行统计分析。2结果�结果见表1~3。�由图1及表1可以看出,模型组5-HT显著高于正常组(P<0.05),说明造模是成功的;而高剂量组与模
8、型组比,显著低于模型组,因此鼻疗法喷剂能有效降低5-HT含量。从表2可以看出,模型组下丘脑、脑干中NO的含量皆极显著高于正常对照组及实验各组(P<0.001),因此,模型是成功的,鼻疗法喷剂能有效降低脑中NO的含量。由图2及表3可以看出,模型组多巴胺显著高于正常组(P<0.05),说明造模是成功的;而高剂量组与模型组比,极显著低于模型组(P<0.001),因此鼻疗法喷剂能有效降低多巴胺含量。3讨论�75-HT是偏头痛发作中重要的神经递质。大脑本身有调节自
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