体外扩增高纯度的人外周血来源的nk细胞的研究论文

《体外扩增高纯度的人外周血来源的nk细胞的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、体外扩增高纯度的人外周血来源的NK细胞的研究论文李晓红马健汪菲菲窦立萍李猛高春记【摘要】本研究探讨从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的优化技术。先用miniMACS及阴性免疫磁珠分选方法，从外周血单个核细胞（PBMNC）得到纯化的NK细胞，随后在干细胞培液基条件下，通过IL2、IL12和IL15等细胞因子的不同组合将培养体系分为IL2组、IL2+IL12组、IL2+IL15组、IL2+IL15+IL12组和对照组（不加任何细胞因子），分别培养15天，每3天半量换液并补充细胞因子；检测分选及扩增前后（CD3-CD56+）NK细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组在不同效靶比下的杀伤率

2、。结果显示经：miniMACS阴性免疫磁珠分选后（CD3-CD56+）NK细胞含量由分选前的11.19±5.25%提高到94.23±3.50%。培养15天后除对照组（CD3-CD56+）NK细胞纯度略下降外，其余4组与扩增前无显著性差异（P＞0.05）。在IL2、IL2+IL12、IL2+IL15、IL2+IL15+IL12培养体系中，NK细胞扩增倍数分别为15.43±1.08.freeliniMACS免疫磁珠阴性分选得少量NK细胞后，应用IL2+IL15培养条件是获得高纯度NK细胞的简单有效方法。【关键词】NK细胞；miniMACS；白介素2；白介素12；白介素15ExVivoEx

3、pansionofHighlyPurifiedNKCellsfromHumanPeripheralBloodAbstractAdoptiveimmunotherapyusingallogeneicnaturalkiller(NK)cellsprovidestobeusefulinrecipientsafterallogeneichematopoieticstemcelltransplantation(AlloHSCT),butitsapplicationhasbeenlimitedbytheinabilitytoobtainsufficientnumbersofpureNKcells

4、.ThisstudyedtooptimizetheexpansionofhighpurityNKcellsfromhumanperipheralblood.First,theNKcellsPBMNCbyusingminiMACS(magiccellselection)andNKCellIsolationKitⅡ.ThentheisolatedcellslineHematopoieticStemCellExpansionMedium,Sigma)supplementedanABserumanddifferentbinationsofIL2and/orIL12,IL15for15d

5、ays.Culturesediaandcytokinesevery3days,anduchhigherthanothers（P＜0.01),butnosignificantdifferencebetselves(P＞0.05).AndthepurityofCD3-CD56+NKcellsselves(P＞0.05).ItisconcludedthathighpurityofNKcellscanbeefficientlyexpandedincultureiniMACS;IL2,.freelia，GVL)效应，并减少移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVH

6、D)的发生［1-3］，故输注供者异源反应性NK细胞已经成为临床移植辅助治疗的新策略［4,5］。然而，外周血中NK细胞含量少（约占淋巴细胞的5%-7%），且目前尚缺乏有效的体外扩增体系，所以NK细胞的广泛临床应用受到了限制。目前的许多体外研究均显示IL2、IL12、IL15对促进NK细胞的分化成熟、活化、增殖及细胞毒活性有重要作用。本研究从方法学角度探索提高NK细胞纯度并采用IL2、IL12、IL15等细胞因子的不同组合，以期优化NK细胞体外扩增的效率及纯度，为NK细胞的进一步临床应用奠定基础。材料NK细胞分选试剂盒（NKCellIsolationKitⅡ，包括荧光标记抗体、

7、磁珠）及miniMACS磁珠分选系统、分离柱（MSColumn）均购自德国美天意公司（MiltenyiBiotec,Germany）。造血干细胞扩增培养基(StemlineHematopoieticStemCellExpansionMedium，SCEM)为Sigma公司产品，RPMI1640培养液为Gibco公司产品。人AB血清购自杭州四季青生物制品公司。IL2、IL12、IL15为Cytolab公司产品。左旋谷氨酰胺（Lglutam