【毕业论文】缺氧对维甲酸诱导基因-i介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究

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1、缺氧对维甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究2015届本科生毕业论文（设计）题目：缺氧对维甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究学院(系)：生命科学学院专业年级：生物技术113班完成日期：2015年6月目录摘要-1-Abstract.-2-第一章绪论-3-1.1研究意义-3-1.2免疫应答简介-3-1.2.1机体免疫应答-3-1.2.2抗病毒免疫信号通路-4-1.2.3重要的细胞因子-4-1.3.缺氧免疫调控研究现状-8-第二章材料与方法-8-2.1材料-8-2.2主要试剂-8-2.3主要设

2、备和软件-9-2.4方法-9-2.4.1小鼠腹腔巨噬细胞的分离-9-2.4.2RNA提取-9-2.4.3.逆转录反应-10-2.4.4实时定量PCR-10-2.4.5免疫印迹法-11-2.4.6过表达质粒的构建-12-2.4.7酶联免疫吸附测定法-13-2.4.7流式细胞术-13-2.4.8过表达质粒的构建-13-2.5技术路线-15-2.5.1体外缺氧抗病毒免疫应答研究-15--25-缺氧对维甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究2.5.2体内缺氧抗病毒免疫研究-15-2.5.3缺氧抗病毒免疫调控机制研究

3、-15-第三章结果与讨论-16-3.1结果-16-3.1.1缺氧促进流感病毒诱导的细胞因子风暴,增加小鼠死亡率-16-3.1.2缺氧促进巨噬细胞对病毒的免疫应答-16-3.1.3缺氧通过PD-1依赖的机制调控RIG-I的表达-17-3.2讨论-19-参考文献-21-致谢-23--25-缺氧对维甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究缺氧对维甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究摘要：维甲酸诱导基因Ⅰ（retinoicacidinduciblegene-Ⅰ,RIG-Ⅰ）位于细胞质内，识别病毒双链R

4、NA的解旋酶，是抗病毒信号通路的胞内主要受体蛋白，属于RIG-Ⅰ样受体（RIG-Ⅰlikereceptors,RLRs）家族成员。近年来，大量研究证实缺氧是调控机体炎症反应的一个重要因素。虽然没有研究报道缺氧和RIG-I信号之间是否存在关联，但体外细胞培养体系中发现缺氧显著抑制流感病毒感染和扩增效率。本实验研究缺氧对维甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制。在缺氧条件下利用HINI感染小鼠发现缺氧促进流感病毒诱导的细胞因子，增加小鼠死亡率。体外H1N1流感病毒刺激，QPCR和ELISA检测发现缺氧促进巨噬细胞对

5、病毒的固有免疫应答。分别利用RNA干扰技术和分子克隆技术，检测PD-1下调和过表达状态下细胞因子的表达变化,发现细胞因子的表达与PD-1呈负相关。H1N1刺激转染PD-1SiRNA的Raw264.7，westernblot检测不同时间点相关蛋白水平发现，相比于常氧对照组，低氧培养的巨噬细胞刺激后表达更低水平p-SHP-2和更高水平的RIG-Ⅰ蛋白。实验结果表明缺氧可以促进病毒感染后巨噬细胞的固有免疫应答并通过PD-1依赖的机制调控RIG-Ⅰ的表达。关键字：缺氧维甲酸诱导基因-Ⅰ；免疫应答；程序性死亡受体1-25-缺氧对维

6、甲酸诱导基因-I介导的抗病毒免疫应答的调控及机制研究TheroleofhypoxiainregulatingRIG-Ⅰ-mediatedantiviralresponseAuthor:HuanleLiTutor：YangLiu(CollegeoflifesciencesNorthwestA&FUniversityShaanxiYanglLing712100)Abstract：Retinoicacidinduciblegene-Ⅰwhichcanrecognizedouble-strandedRNAvirushelicas

7、e，locatedinthecytoplasm，istheintracellularsignalingpathwaysofthemajoranti-virusreceptorprotein,belongingtoRIG-Ⅰlikereceptor(RIG-Ⅰlikereceptors,RLRs)familymembers.Inrecentyears,numerousstudiesconfirmthathypoxiaisanimportantfactorinregulatingtheinflammatoryresponse

8、.AlthoughithavenotbeenreportedanassociationbetweenhypoxiaandRIG-Isignalyet,Itwasfoundthatbothvirusinfectionandamplificationefficiencyaresignificantlyinhibitedu