疏筋解毒方对lps诱导mg激活所介导免疫应答干预的实验研究

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1、陕西中医学院硕士学位论文疏筋解毒方对LPS诱导MG激活所介导免疫应答干预的实验研究姓名：齐娜申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：王亚丽201204背景与意义：摘要／／瀚帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)，是最常见的神经系统慢性退行性疾病之一。中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)缓慢进展的炎症反应可能在PD的病理进程中扮演着重要角色，小胶质细胞(Microglia,MG)，作为CNS最重要的免疫细胞，在这一病理过程中处于核心地位。激活的小胶质细胞所产生的大量炎症介质，如一氧化

2、氮(NO)、白细胞介素l13(IL．1B)、肿瘤坏死因子a('rNF．a)、干扰素Y(IFN)及前列腺素E-2(PGE．2)等被认为对神经元损伤具有重要作用。近些年研究表明，小胶质细胞的激活在PD的病理形成过程中具有关键作用。于是，以抑制小胶质细胞的激活过程为靶点设计出全新的治疗策略，以延缓PD的进程已成为一项热点研究。近年来，单味中药及中药复方具有较好的神经保护作用因而备受关注。然而，中药复方是否具有抑制中枢神经系统小胶质细胞激活的作用，若有此作用，是通过何种机制发挥的等一系列问题亟待阐明。目的：从测定小胶质细胞的细胞活力、增殖活

3、性及其释放NO的浓度等微观方面与观察其细胞形态变化的直观角度出发，研究疏筋解毒方对脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)诱导小胶质细胞激活所介导免疫炎症损伤的干预作用，探讨小胶质细胞的激活与多巴胺能神经元变性、损伤存在的可能机制。方法：采用温和消化法获取高纯度的原代小胶质细胞，将纯化的细胞分为五组：正常对照组、模型对照组和大中小剂量的中药组。通过不同浓度的SD大鼠含药血清及正常血清作用12h、24h、36h及48h后，分别进行MTT细胞活力及增殖活性测定、Griess法NO浓度检测以及免疫组化染色观察细胞形态的变化。

4、结果：l利用温和消化法，能够获取高纯度(98．9％)的小胶质细胞。此法较机械振摇法等获取的细胞纯度高，其收获的细胞数量亦较显著，100ml细胞培养瓶可收获纯化的小胶质细胞数量为1．0×106／瓶。2疏筋解毒方具有抑制激活小胶质细胞的细胞活力及增殖活性的作用。MTT结果显示，与对照组相比，各时段该中药复方的大、中、小剂量组中小胶质细胞的细胞活力OD值均明显降低(尸<0．05)；与小剂量组比较，大、中剂量组的OD值均显著降低(P<0．05)，其中又以大剂量组的抑制作用较强，且抑制时间更持久。3Griess法检测结果提示疏筋解毒方具有抑制

5、激活小胶质细胞释放NO的作用。实验发现小胶质细胞增生活跃的同时伴随有对NO释放的显著增加，模型对照组中，在它被激活的24h'--36h这一时段中，其释放于细胞上清的NO浓度升高最为明显：而该中药复方的大、中、小剂量对这一过程有不同程度的抑制作用，其中大剂量的有效性更为显著。4终浓度为lug．ml。的LPS可诱导小胶质细胞出现明显的形态学变化，经疏筋解毒方干预后，其激活的形态及免疫组化着色程度较对照组均有所改善。结论：l利用温和消化法能够收获高纯度的小胶质细胞，且细胞趋于静息状态历时短暂，有利于各种原代培养小胶质细胞的离体实验研究，值

6、得推广。2疏筋解毒方具有抑Nd,胶质细胞激活所介导免疫炎症损伤的作用，该方能够减弱激活小胶质细胞的细胞活力及增殖活性，并降低其对NO的释放，从而减少氧化应激对神经元的损伤，发挥神经保护作用。．3疏筋解毒方对激活小胶质细胞的形态具有一定的影响作用，可能有减缓激活小胶质细胞自身快速凋亡裂解死亡而促进其向静息形态转变的作用。从形态学上表明该方可通过阻抑小胶质细胞的激活以达到神经保护的作用。4综合分析，疏筋解毒方可有效干预激活小胶质细胞所介导的免疫炎症损伤，且大、中、小三个剂量的干预作用可呈现出一定的量效关系。疏筋解毒方能够通过抑制小胶质细

7、胞的激活以达到阻抑或延缓PD的发生及进展过程。关键词帕金森病；疏筋解毒方；小胶质细胞；免疫炎症损伤；神经保护TheinhibitoryeffectofshujinjieduprescriptiontotheimmuneresponsecausedbyLPS。。inducedmicrogIiaactivationbackgroundandSignificance：AbstractParkinson’Sdisease(PD)，oneofthemostcommoncllromcregressivediseasesofnervoussyst

8、em．Theslowlyprogressinginflammatoryresponseofcentralnervoussystem(CNS)mayplayamuchimportantroleintheprocessofPD．Asthe