微量注射甲基软海绵酸对大鼠海马神经元放电的影响

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1、微量注射甲基软海绵酸对大鼠海马神经元放电的影响【关键词】Alzheimer病；甲基软海绵酸；自发放电；Morris水迷宫；动物模型【Abstract】ObjectiveInordertoexploreaneer’sanimalmodel.MethodsOkadiacacid(0.4mmol/L1μl)pus,onceeverytes.Theplacenavigationandspatialprobeabilityinratsazeonday20afterthefirstinjection.Afterthespatialprobetest,thespontaneous

2、dischargepus.ResultsByinjectingokadaicacidintothedorsalhippocampus,thespatiallearningandmemoryabilityinratspairedbyokadaicacid,thedischargefrequencyofhippocampusneuronsatofthedischargepussignificantly.ItsuggeststhatthismethodcanbeusedtoestablishtheexperimentalmodelofAD.【Keyer’sdisease,

3、okadaicacid,spontaneousdischarge,Morrisaze,animalmodelAlzheimer病（AD）是常见的老年慢性退行性神经疾病，到目前为止，其确切病因和发病机制尚不清楚。临床上首先表现为近期记忆力降低，继而表现为持续性智能衰退，失语，判断推理能力丧失，以及运动功能障碍等。目前用于AD研究的模型较多，但均不理想。有文献报道，大鼠侧脑室微渗透泵慢性注射甲基软海绵酸（大田酸；Okadaicacid，OA）后，出现学习记忆障碍，在海马CA1区和齿状回见到双螺旋细丝（pairedhelicalfilament,PHF）和淀粉样蛋白前体（

4、APP）阳性营养不良性轴突等改变，并伴有细胞凋亡现象，认为OA毒性动物可能是一种较理想的AD模型［１，２］。本文通过大鼠海马背侧埋管多次微量注射OA，观察大鼠条件反射及海马神经元自发放电，旨在探讨大鼠海马微量注射OA后的变化，以期能够找到一种理想的老年痴呆模型。1材料和方法1.1试剂和仪器OA粉剂（购自Sigma公司），临用前溶解于10%二甲亚砜（DMSO）中，制成浓度为0.4mmol/L的溶液；DigBehvMorris水迷宫（上海计量软件科技有限公司）；脑立体定位仪、DYT-1型微电机操纵器（天津医疗器械研究所）；微机、BL-420E生物机能系统（成都泰盟科技有

5、限公司）。1.2动物及分组orris水迷宫由圆形水池及自动录像、记录系统两部分组成。水池直径160cm，水池深50cm，水深30cm，水温(25±1)℃，水池内充放洁净自来水，水中加适量黑色素，以隐蔽站台。实验时将水池划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个象限，见图1。在水迷宫水池壁各象限中点处标明4个入水点，在第Ⅲ象限中放置一个直径12cm的站台，没于水下1cm，以站台中心6cm的区域为E区。实验时将大鼠面向池壁，分别从四个象限的入水点放入水池，自动录像系统记录大鼠找到平台的时间和游泳路径。实验共7天，即6d进行定向航行实验（placenavigationtest）：将大鼠从入

6、水点放入水池中，记录60s内大鼠从入水到爬上平台所需时间即逃避潜伏期。每只大鼠每天训练4次，即从四个象限不同入水点入水进行训练各1次。于第7天进行图1Morris水迷宫训练示意图1.5海马神经元单位放电术后第27天，大鼠经腹腔注射20%乌拉坦（1g/kg）麻醉后，固定在立体定位仪上，参照大鼠脑立体定位图谱［3］，在A4.0~5.0mm，L5.0~5.2mm，H2.7~7mm，用DYT-1型微电机操纵器，将玻璃微电极插入左侧海马内，引导海马CA1、CA3区神经元自发放电。微电极内充灌0.5mol/L醋酸钠和2%滂胺天蓝溶液，电极尖端直径1~2μm,直流电阻为2~15M

7、Ω。微电极引导信号经放大器放大，监听器监听,电脑BL-420生物机能系统记录并分析，进行数据处理。实验结束电泳滂胺天蓝，通电10~15min以标记记录部位，然后经主动脉灌注，取脑，置于10%福尔马林溶液中固定，1周后，作连续冰冻切片，进行组织学鉴定，以确定记录部位，定位不准确的结果舍去。1.6统计学处理实验数据以x±s表示,采用t检验和χ2检验。2结果2.1OA对大鼠空间学习记忆的影响大鼠海马背侧首次微量注射20d后，用Morris水迷宫法检测两组大鼠的定向航行、空间探索能力。定向航行试验结果见表1。在6d的训练中，两组的逃避潜伏期均不断缩短，但对照组第6天比第