中药益发复方对人头皮毛囊体外培养的研究

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1、中药益发复方对人头皮毛囊体外培养的研究：陈达灿刘维陈修漾孙静周丹韩凌【关键词】中药益发摘要:【目的】观察中药益发复方对人头皮毛囊体外培养的影响。【方法】健康志愿者1名，采血制备空白血清后，给予18.33g/kg剂量的益发复方口服，连续7d，于第8天清晨空腹服药后采血制备含药血清;复制人头皮游离毛囊体外培养模型，分为7组:空白对照组加sE无血清培养基，空白血清组分别加入体积分数为5%、10%、20%血清，益发复方含药血清组分别加入体积分数为5%、10%、20%的中药含药血清;采用倒置显微镜观察毛囊大体形态变化，并测量毛囊生长

2、长度和生长时间，计算前4d平均生长速度和最终生长长度。【结果】不同剂量空白血清组前4d平均生长速度、生长时间、最终生长长度均减少，与空白对照组比较具有显著性差异（均P<0.05或P<0.01）;不同剂量中药含药血清均可不同程度升高以上指标（P<0.05或P<0.01），其中以体积分数为10%中药含药血清的作用更为显著。【结论】益发复方具有促进毛囊生长、维持毛囊正常形态的作用，而空白血清对毛囊生长具有一定的负影响。　关键词:秃发/中药疗法;益发复方/药物作用;器官培养;人　中药益发复方于我院皮肤科名老

3、中医的经验方，是根据中医理论并结合多年的临床实践经验和现代药理学研究研制开发而成的内服生发制剂，在近年来治疗脱发病的临床应用中已取得较好的疗效［1-2］。为从细胞生物学角度初步探讨其作用机理，我们通过在体外建立毛囊器官培养模型，观察了该方对游离人发毛囊生长情况的影响。1材料与方法1.1标本20～40岁脑外科病人手术过程中废弃的正常全层头皮（无秃发、感染等异常）。1.2试剂与仪器毛囊培养基由sE无血清培养基（GibcoBRL公司），L-谷氨酰胺（Amresco公司）2mmol/L，Hepes20mmol/L、牛胰岛素10μg

4、/mL、转铁蛋白10μg/mL（Sigma公司），氢化可的松（扬州制药厂）0.4μg/mL，青霉素、链霉素（华北制药股份有限公司）100U/mL组成。手术显微镜（YZ20P5，苏州六六视觉科技有限公司）;倒置显微镜（NikonT300带目镜测微尺，日本尼康公司）;CO2培养箱（HSO301T-VBA，美国Harris公司）;电热恒温水浴箱（HH・in灭活处理后，用针头滤器滤过除菌，-20℃以下保存备用。1.3.2中药含药血清的制备［3-4］益发复方由女贞子20g、菟丝子20g、黄芪15g、制首乌15g、蒲公英

5、15g、丹参15g、甘草10g组成，生药由广东省中医院中药房提供。上述中药加水1000mL，浸泡30min，煮沸后文火煎至200mL，倒出药液;加水400mL复煎，煮沸后文火煎至100mL，合并两次药液，给同一健康志愿者服用（18.33g/kg），每次1剂，每天2次，连续给药7d，于第8天清晨空腹服药（服药前应禁食12h）后1h采血，血清制备方法同1.3.1。1.4游离毛囊的分离与培养［5-6］从手术室取回新鲜全层头皮标本，用生理盐水漂洗血污，并剪除外露的毛干及部分过多的脂肪组织（注意勿伤及毛球），再用D-Hanks液（含

6、青霉素400U/mL、链霉素400U/mL）连续冲洗3遍，每遍3～5min;将头皮标本剪成0.3～0.5cm宽的皮条，用眼科手术剪从真皮与皮下组织交界处剪开，弃真皮和表皮部分。在解剖显微镜下（×8）用显微外科镊夹紧毛根远端，顺毛囊方向轻轻从皮下组织中拔出完整的毛囊，置于无菌培养液中待养。在倒置显微镜下选取结构完整的生长早期毛囊（即外毛根鞘完整、毛乳头形态圆润光滑，第1天即有明显生长，生长长度l≥0.1mm的毛囊），在超净台内将其小心转移至24孔板内，每孔1根毛囊，再加入毛囊培养基0.5mL，加盖，置于37℃、含体积分数为5

7、%CO2及一定湿度的培养箱中进行培养，每隔4d换培养液1次，每次换液50%左右。1.5实验分组共分为7组，第1组以不加任何中西药的sE无血清培养基作为空白对照组;第2～4组为分别加入不同容积培养基稀释后体积分数为5%、10%、20%的空白血清组;第5～7组为分别加入不同容积培养基稀释后体积分数为5%、10%、20%的中药含药血清组。　1.6观测指标1.6.1毛囊形态观察在倒置显微镜下连续观察每日各组毛囊毛球部及其内部结构（包括毛母质、毛乳头以及内、外毛根鞘）的形态变化，记录其变化特点，并分别照相。1.6.2毛囊的生长速度及

8、其生长时间的测定在装有目镜测微尺的倒置显微镜下，测量每24h各组毛囊从毛根基部至毛干游离顶端的长度，直至毛囊不再延长。记录毛囊的生长长度和生长天数，并计算出前4d的平均生长速度和最终生长长度。1.7统计学方法应用SPSS10.0统计软件对实验数据进行统计处理，各组间的比较采用成组t检验和方差分析。2结果