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1、槐米中芦丁和槲皮素含量测定方法研究进展论文.freel的吸光度,经过粗选和细选,分别找出槲皮素和芦丁的等吸收波长λ1247、λ2266、λ3340、λ4370。然后分别配制一系列浓度的芦丁、槲皮素溶液,.freel和266nm、波长340nm和370nm处的吸光度,计算其对应的吸光度差值,分别作出ΔA-C校准曲线及线性回归方程。用上述方法测定槐米中芦丁和槲皮素的含量。将槐米的乙醇提取物配制成一系列不同浓度的甲醇溶液,在波长247nm和266nm、340nm和370nm下分别测定其吸光度值,并计算吸光度差值,据回归方程计算芦丁和槲皮素的浓度。然后分别计算样品中芦丁和槲皮素的含量,6
2、个样品中芦丁平均含量为80.60%,RSD＝1.61%；槲皮素平均含量为9.49%,RSD＝1.53%。1.2荧光光度法利用铝与槲皮素形成荧光配合物,姚氏等5采用荧光光度法测定槲皮素。文献中选择测定条件为激发波长365nm,发射波长498nm,测定温度为室温,溶液酸度控制为pH＝6,选用2×102mol/L铝标准溶液。在10mL比色管中,加入一定量的槲皮素标准溶液,再加入三氯化铝标准液1mL,用95%乙醇稀释至刻度,振摇均匀后放置15min,用1cm比色皿,在960型荧光光度计上测其荧光强度,同时做空白试验,绘制工作曲线。将槐米乙醇提取物用蒸馏水溶解,过聚酰胺柱,待水解液过完后,
3、再用蒸馏水洗柱3次,用95%乙醇洗柱,洗至醇洗液加三氯化铝无荧光反应。合并乙醇洗液,测其中样品的含量。方法加标回收率97.8%～100.0%,RSD＝2.58%(n＝6)。1.3催化动力学光度法在盐酸介质中,微量芦丁对重铬酸钾氧化靛红的反应有明显的催化作用,崔氏等6建立了测定芦丁的催化动力学光度法。取2只10mL具塞刻度试管,其中一只加入一定量的芦丁标准液,另一只不加,再分别依次加入0.60mL0.10%靛红溶液、0.90mL0.30mol/L盐酸溶液、1.10mL0.010mol/LK2Cr2O7溶液,然后加水至刻度,摇匀,反应10min后,以水为参比,用1cm比色皿于611n
4、m波长处测量非催化体系的吸光度A0和催化体系的吸光度A并计算ΔA。将槐米乙醇提取液按实验方法进行测定,同时做标准加入回收实验。方法的线性范围是0.003～0.09μg/mL和0.10～100μg/mL,检出限为0.003μg/mL,回收率为95.5%～102.5%(n＝4)。1.4固相萃取-分光光度法李氏等7采用固相萃取-分光光度法联用来测定中药槐米中芦丁含量。准确配制不同浓度的芦丁标准溶液,用移液管准确量取溶液置于100mL量瓶中,加甲醇至5mL体积,加0.30mL5%NaN02溶液,放置6min；再加0.30mL10%Al(NO3)3溶液,放置6min；再加4.00mL4%N
5、aOH溶液,最后加甲醇至刻度,摇匀。室温放置15min后,在紫外分光光度计上于λ＝500nm处测定吸光度,处理数据得回归方程。样品测试：先用5mL石油醚洗柱,再用5mL甲醇洗柱,最后加水5mL洗柱；加槐米甲醇提取溶液上柱,每2mL为单位收集流出液。UV测定：以第7～8mL流出液测试并进行数据处理得原药材样品中芦丁的含量为29.1%。将标准品溶液及原药材样品液定量混合后依上法进行分析,平均回收率为99.98%,RSD＝0.012%(n＝3)。1.5卡尔曼滤波光度法王氏等8采用卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮素含量。准确配制芦丁、槲皮素甲醇标准溶液2个系列(每个系列3～5个)
6、溶液。取上述系列标准溶液,在230～300nm范围内,每间隔2nm测其吸光度,数据进行线性回归处理,求出各自的吸光系数。取芦丁、槲皮素浓度一定的模拟样品分别测定5次,计算RSD分别为2.54%和1.54%。取已知含量的模拟样品6个,加入芦丁、槲皮素适量,测定其含量,方法的平均回收率分别为：芦丁99.1%(n＝6,RSD＝1.58%),槲皮素99.2%(n＝6,RSD＝1.98%)。槐米提取物中芦丁和槲皮素的测定：准确称取一定量样品,用甲醇提取后,以上述方法测得芦丁含量为82.32%,RSD＝0.45%,槲皮素含量为9.59%,RSD＝1.2%(n＝3)。1.6阻抑动力学光度法张氏
7、等9利用在稀硫酸介质中,微量芦丁对高碘酸钾氧化玫瑰桃红R褪色反应有明显的阻抑作用,据此建立了测定微量芦丁的动力学光度法。取2支10mL具塞刻度试管,分别加入0、0.4mL芦丁标准溶液,再分别依次加入3mol/LH2SO41.0mL、0.5g/L玫瑰桃红R溶液1.0mL、0.01mol/L的KIO4溶液0.7mL,加水稀释至刻度,混匀。在(94±0.1)℃恒温水浴加热反应4min后,迅速启开管塞用流水冷却4min,以水为参比,用1cm吸收皿在分光光度计上于521nm波长处测量褪色体
