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1、槐米中芦丁和槲皮素含量测定方法研究进展作者：王立军 曹晓钢 于刚 牛小花【关键词】槐米 芦丁 槲皮素 含量测定 综述 槐米中的主要有效成分是芦丁和槲皮素等黄酮类物质。芦丁具有广泛的药理活性,能维持及恢复毛细管的正常弹性,增强其抵抗力,防止血细胞凝聚,临床用于防治脑溢血、高血压等心脑血管疾病[1]；槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗过敏、抗菌、抗病毒等多方面的药理作用[2]。我国是芦丁的出口国,槐米是提取芦丁的主要原料,2005版《中华人民共和国药典》(一部)规定,槐米中总黄酮的含量(以无水芦丁计)不低于20%,无水芦丁(C27H30O16)不少于1
2、5%[3]。因此,研究槐米中芦丁和槲皮素含量测定方法对槐米质量控制有很重要的意义。现将槐米中芦丁和槲皮素的含量测定方法综述如下。 1分光光度法 1.1等吸收紫外光度法 李氏等[4]用等吸收紫外光度法同时测定槐米中的芦丁和槲皮素。分别配制槲皮素和芦丁的单组分标准溶液,测定它们在波长240～38016nm的吸光度,经过粗选和细选,分别找出槲皮素和芦丁的等吸收波长λ1247、λ2266、λ3340、λ4370。然后分别配制一系列浓度的芦丁、槲皮素溶液,测定其在波长247nm和266nm、波长340nm和370nm处的吸光度,计算其对应的吸光度
3、差值,分别作出ΔA-C校准曲线及线性回归方程。用上述方法测定槐米中芦丁和槲皮素的含量。将槐米的乙醇提取物配制成一系列不同浓度的甲醇溶液,在波长247nm和266nm、340nm和370nm下分别测定其吸光度值,并计算吸光度差值,据回归方程计算芦丁和槲皮素的浓度。然后分别计算样品中芦丁和槲皮素的含量,6个样品中芦丁平均含量为80.60%,RSD＝1.61%；槲皮素平均含量为9.49%,RSD＝1.53%。 1.2荧光光度法 利用铝与槲皮素形成荧光配合物,姚氏等[5]采用荧光光度法测定槲皮素。文献中选择测定条件为激发波长365nm,发射波长4
4、98nm,测定温度为室温,溶液酸度控制为pH＝6,选用2×102mol/L铝标准溶液。在10mL比色管中,加入一定量的槲皮素标准溶液,再加入三氯化铝标准液1mL,用95%乙醇稀释至刻度,振摇均匀后放置15min,用1cm比色皿,在960型荧光光度计上测其荧光强度,同时做空白试验,绘制工作曲线。将槐米乙醇提取物用蒸馏水溶解,过聚酰胺柱,待水解液过完后,再用蒸馏水洗柱3次,用95%乙醇洗柱,洗至醇洗液加三氯化铝无荧光反应。合并乙醇洗液,测其中样品的含量。方法加标回收率97.8%～100.0%,RSD＝2.58%(n＝6)。16 1.3催化动力学
5、光度法 在盐酸介质中,微量芦丁对重铬酸钾氧化靛红的反应有明显的催化作用,崔氏等[6]建立了测定芦丁的催化动力学光度法。取2只10mL具塞刻度试管,其中一只加入一定量的芦丁标准液,另一只不加,再分别依次加入0.60mL0.10%靛红溶液、0.90mL0.30mol/L盐酸溶液、1.10mL0.010mol/LK2Cr2O7溶液,然后加水至刻度,摇匀,反应10min后,以水为参比,用1cm比色皿于611nm波长处测量非催化体系的吸光度A0和催化体系的吸光度A并计算ΔA。将槐米乙醇提取液按实验方法进行测定,同时做标准加入回收实验。方法的线性范围是
6、0.003～0.09μg/mL和0.10～100μg/mL,检出限为0.003μg/mL,回收率为95.5%～102.5%(n＝4)。 1.4固相萃取-分光光度法 李氏等[7]采用固相萃取-分光光度法联用来测定中药槐米中芦丁含量。准确配制不同浓度的芦丁标准溶液,用移液管准确量取溶液置于100mL量瓶中,加甲醇至5mL体积,加0.30mL5%NaN02溶液,放置6min；再加0.30mL10%Al(NO3)3溶液,放置6min；再加4.00mL4%NaOH溶液,最后加甲醇至刻度,摇匀。室温放置15min后,在紫外分光光度计上于λ＝50016
7、nm处测定吸光度,处理数据得回归方程。样品测试：先用5mL石油醚洗柱,再用5mL甲醇洗柱,最后加水5mL洗柱；加槐米甲醇提取溶液上柱,每2mL为单位收集流出液。UV测定：以第7～8mL流出液测试并进行数据处理得原药材样品中芦丁的含量为29.1%。将标准品溶液及原药材样品液定量混合后依上法进行分析,平均回收率为99.98%,RSD＝0.012%(n＝3)。 1.5卡尔曼滤波光度法 王氏等[8]采用卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮素含量。准确配制芦丁、槲皮素甲醇标准溶液2个系列(每个系列3～5个)溶液。取上述系列标准溶液,在230～3
8、00nm范围内,每间隔2nm测其吸光度,数据进行线性回归处理,求出各自的吸光系数。取芦丁、槲皮素浓度一定的模拟样品分别测定5次,计算RSD分别为2.54%和1.54
