谷氨酸单钠对新生小鼠视网膜神经细胞c┐fos表达的影响论文

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1、谷氨酸单钠对新生小鼠视网膜神经细胞c┐fos表达的影响论文.freelm-2，比正常小鼠c-fos的表达明显增高（1474vs744cellsmm-2，P0.05;1250vs538cellsmm-2，P0.05;859vs404cellsmm-2，P0.05）.结论外源性谷氨酸作用于成长发育中仔鼠的视网膜神经细胞，并引起细胞内c-fos过度表达，可能诱导视网膜神经细胞凋亡.Keyates;excitotoxicity;genes，fos;retina;miceAbstract:AIMToobs

2、ervethetoxiceffectofmonosodiumglutamateontheexpressionofc-fosintheretinalneuronsinmice.METHODSKunmingmiceonosodiumglutamateviaoraladministrationatthelatestageofpregnancy.Theeyeballsoffilialmiceovedonthepostnataldaysof10，20and30，thespecimensthenfixeda

3、ldehydeandsectionedintopathologicalslicesbytheCryocut.Immunohistochemistryonosodiumglutamate-treatedmice，therem-2positiveimmunoreactiveneuronsofc-fosonpostnatalday10，1250cellsmm-2onpostnatalday20，859cellsmm-2onpostnatalday30m-2inthenormalmiceretinas（

4、1474vs744cellsmm-2，P0.05;1250vs538cellsmm-2，P0.05;859vs404cellsmm-2，P0.05）.CONCLUSIONExogenousmonosodiumglutamatehastheeffectsonthedevelopingretinalneuronsthatitcanproduceanoverexprssionofc-fosintheretinalcells，correspondingolL-1PBS2min，接灌注预冷的40gL-1多

5、聚甲醛固定液3min.取出鼠眼后放在4℃多聚甲醛固定液中4h，再置于300gL-1蔗糖溶液中4℃18～28h，待其沉底，去蔗糖溶液，用组织包埋剂附着，快速冷冻，-70℃保存.1.2方法10，20和30d龄（P10，P20和P30）仔鼠眼在恒冷切片机上切成12～14μm厚度的组织切片，平铺于经硅化处理的载玻片上.每块组织切片周围涂上指甲油以防止液体流脱.切片从-70℃取出后室温下干燥30～45min，PBS浸洗10min，40gL-1多聚甲醛30min，PBS冲洗，正常羊血清封闭10min，1∶1

6、50一抗4℃过夜（16h），生物素化二抗37℃孵育50min，链酶亲和素生物素酶复合物37℃孵育40min.每一步孵育后均用PBS冲洗，最后一次PBS冲洗后加DAB显色8～10min，组织切片呈现深棕色反应，在PBS中浸15min，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片.设立①不加一抗的阴性对照和②未使用谷氨酸的正常对照，其免疫组织化学步骤同上.相邻组织切片做Nissl染色以确定组织结构.Olympus光学显微镜下阅片并摄像.计数各组视网膜神经细胞阳性细胞数，应用SigmaStat2.0统计软件

7、作方差分析.2结果c-fos免疫阳性细胞在镜下胞核呈深棕色，圆形、椭圆形或是不规则形状，散在或集中分布于视网膜层中（Fig1）.在10d龄小鼠，谷氨酸组视网膜神经细胞c-fos免疫阳性细胞比对照组明显增高（1474vs744cellsmm-2，P0.05）;在20d龄小鼠，谷氨酸组视网膜神经细胞c-fos免疫阳性细胞比对照组明显增高（1250vs538cellsmm-2，P0.05）;在20d龄小鼠，谷氨酸组视网膜神经细胞c-fos免疫阳性细胞比对照组明显增高（859vs404cellsmm-2

8、，P0.05，Tab1，Fig1）.两组免疫阳性细胞在出生后10d达最高;随生长发育时间的增长，c-fos阳性细胞数不断减少（Tab1）.3讨论谷氨酸是中枢神经系统内的主要内源性兴奋性神经递质，它可以选择性地存在于谷氨酸能神经末梢和突触囊泡，在遇到生理性刺激时从突触前膜释放，引起突触后膜去极化.在正常情况下，谷氨酸对中枢神经细胞的功能起增强和保护作用，但过量的谷氨酸对中枢神经系统有兴奋毒性.有研究结果提出，4gkg-1的谷氨酸单钠sc可以引起PA亚型，主要由flop型的剪接变异体组成［12］.我