噪声暴露对豚鼠耳蜗cfos基因表达的影响论文

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1、噪声暴露对豚鼠耳蜗cfos基因表达的影响论文查定军,薛涛,乔莉,刘大顺,高雪,陈俊,邱建华【摘要】目的:观察噪声暴露后豚鼠耳蜗cfos基因表达的变化.方法:选用健康雄性白色豚鼠32只，随机分为4组，1组为正常对照组，另3组为实验组.实验组在120dBspL的4kHz窄带噪声中暴露4h,分别测试噪声暴露后2，48,168h及对照组豚鼠听性脑干反应（ABR）.用免疫组织化学染色分析cfos基因在耳蜗的表达情况，用计算机图像分析系统测量耳蜗cfos蛋白的平均吸光度值.结果：噪声暴露后豚鼠ABR阈值及耳蜗中cfos蛋白的平均吸光度值较正常组均增大；随

2、着时间的延长ABR阈值及cfos蛋白的平均吸光度值均逐渐恢复，168h组的ABR阈值及cfos蛋白的平均吸光度值均低于2h组和48h组.结论:噪声暴露后耳蜗cfos基因表达增高，可能与噪声暴露后耳蜗毛细胞、螺旋神经节等结构的损伤修复有关.【关键词】cfos基因；耳蜗；噪声；豚鼠【Abstract】AIM:Toinvestigatethechangesofcfosexpressioninthecochleaofguineapigsafternoiseexposure.METHODS:Thirtytaleguineapigslydistribu

3、tedinto4groups:anormalcontrolgroup,and3experimentalgroups.Theexperimentalgroupsagedanimalmodel.Auditorybrainstemresponse(ABR)munocytochemistryeasuredageanalysissystem.RESULTS:ThethresholdofABRandAvalueofcfosinnoiseexposedcochleaeaybeattributedtothedamageandrecoveryofhaircelland

4、spiralganglionneuroninthecochlea.【Keyg/L.LSAB试剂盒由美国Sigma公司生产，内配生物素标记鼠抗兔抗体（二抗）.过氧化物酶标记链霉亲合素（streptavidin，SA），正常猪血清.DAB显色试剂为美国进口粉剂，用蒸馏水配制过滤而成，现配现用.1.2方法1.2.1动物分组将豚鼠随机分为4组，1组为正常对照组，另3组为实验组，每组动物8只.实验组在准自由声场中暴露于120dBSPL1/3倍频程的4kHz窄带噪声中4h,对照组置于自然安静环境中.1.2.2听阈测试对照组、实验组动物在噪声暴露前及噪声暴露后2,4

5、8,168h检测豚鼠听性脑干反应(auditorybrainstemresponse,ABR)阈值变化用以检测各组反应阈的改变.豚鼠用200mL/L乌拉坦(8mL/kg)腹腔注射进行麻醉，卧位固定.采用银制针形电极，记录电极置于两外耳道口连线与颅内正中线交叉处皮下，电极尖深达颅骨；参考电极置于给声侧外耳道口后下方5mm处皮下，刺激声为click，重复率20次/s，扫描周期为10ms，滤波带宽100～3000Hz，信号叠加1240次，以ABR波III反应阈为标准判断听阈.测试每只豚鼠的两耳各波反应阈.测试数据由测试系统自身附带的微机自动读取、存储，留备分

6、析.1.2.3耳蜗取材与切片制备各组动物用200mL/L乌拉坦(8mL/kg)腹腔注射进行麻醉，仰卧固定，开胸暴露心脏，灌流冲洗，随后灌注40g/L多聚甲醛缓冲液500mL.动物迅速断头处死，取出双侧听泡,打开听泡暴露耳蜗,挑开蜗尖及两窗膜，用4℃25g/L戊二醛+10g/L多聚甲醛行耳蜗阶内灌注固定，漂洗、过蔗糖，冰冻切片.1.2.4免疫组织化学染色免疫组化试剂兔抗鼠cfos多克隆抗体采用LSAB法行冰冻切片免疫组化染色，一抗工作浓度为1∶150；二抗工作浓度1∶300；DAB显色5～20min.TBS代替一抗作为阴性对照，作免疫组化阴性对照染色.

7、1.2.5结果观察与图像分析在Nikon光学显微镜下观察耳蜗螺旋神经节、Corti器免疫组织化学染色结果,通过Nikoncoolpix4500数码相机摄取耳蜗螺旋神经节、Corti器免疫组织化学染色图像,然后转存于计算机上.用多功能真彩色病理图像分析系统,测量耳蜗cfos免疫阳性染色的平均吸光度蛋白免疫阳性染色的吸光度值A值.统计学处理：用SPSS10.0软件进行统计处理，组间比较用方差分析及LSDt检验，P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1豚鼠听阈测听以波III作为判断ABR阈值（dBSPL）的标准.噪声暴露后2h组（96±13）,48h组

8、（87±9）,168h组（52±8）ABR阈值与对照组（28±5）相比，差异有统计学意义（P0