人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文

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1、人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文【摘要】本研究通过体外实验探讨人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFLT1）对白血病细胞增殖的抑制作用。用RTPCR检测白血病细胞株K562、HL60、U937和骨髓LTCICVEGFmRNA、VEGFR1（FLT1）mRNA的表达，用流式细胞术检测上述细胞VEGF和VEGFR1(FLT1)的表达，ELISA法检测细胞培养上清中VEGF的含量，将sFLT1加入K562、HL60白血病细胞株和骨髓LTCIC培养体系中，应用MTT法计算细胞生长的抑制率。结果显示：白血病细胞株K562、HL

2、60、U937和骨髓LTCIC均表达VEGF，以K562表达VEGF量最高。K562和HL60细胞株还表达FLT1，U937细胞和骨髓LTCIC表达的FLT1表达量很低。sFLT1明显抑制白血病细胞株K562及HL60的生长，并且随着sFLT1浓度的增加.freelicCellProliferationbyHumanSolubleVEGFR1AbstractThecurrentstudyansolublevascularendothelialgroiccellsinvitro.Reversetranscriptionpolymerasech

3、ainreaction(RTPCR)RNAandVEGFR1（FLT1）mRNAinK562,HL60,U937leukemiccelllinesandbonemarroetryentionedcells.VEGFconcentrationsinthecellculturesupernatantsinedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).CellproliferationinedbyMTTafteraddingsFLT1toK562，HL60andLTCICculturesystem.Theresults

4、hoiccelllinesandLTCIC,especiallyK562,K562andHL60celllinesalsoexpressedFLT1,butalittleexpressionanner.Thehighestinhibitionrateeleukemiccelllines,andtheinhibitioneffectenhancesastheconcentrationofthesFLT1increase,butsFLT1notinfluencetheproliferationofnormalmarroiccell近年来越来越多的证据表明，血

5、管内皮生长因子（VEGF）与白血病的发生、发展、演变及预后相关，它可以促进白血病细胞的生长、增殖和转移。因此以VEGF为靶点治疗白血病已受到人们的广泛关注，目前许多研究集中于抗VEGF单克隆抗体，VEGF受体抑制剂［1,2］，反义寡核苷酸［3-5］等制剂的研究。然而，这些制剂均非内生性VEGF抑制剂，sFLT1是内生的VEGF受体的拮抗剂，可特异性地与VEGF相结合，从而抑制VEGF的生物学活性［6,7］。sFLT1能抑制VEGF所引起的白血病细胞的增殖，但目前对于sFLT1的研究尚处于探索阶段，本研究以表达VEGF及其受体的白血病细胞株为研究对象，观察s

6、FLT1对白血病细胞株及正常造血细胞的影响。材料和方法试剂RPMI1640培养液、IMDM为Gibco产品；胎牛血清、马血清、TRIZOL、DNAmarker、琼脂糖、MTT均购自北京鼎国生物试剂公司；AMV逆转录酶为Promega产品，dNTPs、Oligod(T)、Taq酶为TaKaRa产品；VEGFELISA试剂盒、sFLT1冻干粉购自北京晶美公司；VEGF单克隆抗体、VEGFR1单克隆抗体购自美国R＆D公司。白血病细胞CML急性变白血病细胞株K562、人早幼粒细胞白血病细胞系HL60，人单核细胞白血病细胞株U937为吉林大学第一医院血液肿瘤科实验室

7、保存株。3种细胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下常规培养，3-4天传代1次。骨髓长期培养起始细胞(LTCIC)取健康成年人抗凝骨髓5ml，按常规分离骨髓单个核细胞，以含12。5%胎牛血清、12.5%马血清的IMDM4ml重悬细胞，建立Dexter培养体系，每周半量换液2次。VEGF和FLT1的检测VEGFmRNA和FLT1mRNA的RTPCR法检测首先在NCBIGenBank中查到VEGFmRNA及FLT1mRNA序列,根据文献确定目的基因的克隆范围,.freelmol/L的dNTPs3μl，RNa

8、sin2μl，AMVR