新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究论文

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1、新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究论文严泉剑李六金张宇梅杨贵忠刘海军郭金龙王禾邵国兴【关键词】,骨髓基质细胞【Abstract】AIM:Toinvestigatethefunctionparametersoftissueengineeredbladdersarroalcells（MSCs）.METHODS：TheMSCsandthebladder-shapedaccellularorganspecificmatrix(BAMG)theNey.Theanimalslyassignedtothreegroups.GroupA(n=6)

2、underetryandradiographystudiesedserially.Animalsed.RESULTS：Theaveragetimeelapsedbetarroplantationofthetissue-engineeredneobladdersarkeddifferenceinbladderpliance(11%,104%,and107%respectively).Histologically,groupCshoalcellularorganizationconsistingofatrilayerofurothelium,su

3、bmucosaandmuscle.TheGroupA,Bpresentedapatternofnormalurothelialcellsucosaandathinlayerofmusclefibers.CONCLUSION：OurstudydemonstratesthattheMSCscanbesuccessfullyusedinrabbitsbladderaugmentationsandreplacementbytissueengineeringtechniques.【Keyarroalcells;bladder;transplatatio

4、n;tissueengineerig【摘要】目的:研究骨髓基质细胞（MSCs）在兔组织工程膀胱中的应用.方法:按文献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG)，从兔胫骨中分离出MSCs，体外扩增后接种于BAMG外表面，在低糖DMEM（LGDMEM）培养12h，与BAMG复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代.20只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术.实验随机分为3组.A组6只直接缝闭三角区；B组7只用膀胱形状的BAMG进行重建；C组7只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术.术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料.

5、12L10mmolL-1PBS(pH70)和1gL-1的叠氮钠搅拌6h使部分细胞溶解.在50mL含2000Kunitz单位DNA酶（Sigma）的1molL-1NaCl溶液中振摇14h,.freelL40gL-1去氧胆酸钠盐（含1gL1叠氮钠）中振摇6h.获取的BAMG在PBS中洗3遍.4℃置于1gL-1叠氮钠和100gL-1硫酸新霉素中储存.1.2MSCs分离培养全骨髓细胞获取（arroo龄实验用新西兰兔的胫骨穿刺点，即关节腔下10～25cm胫骨前缘处穿刺抽取骨髓［３］，注射器吹散，所获有核细胞计数.以(01~20)×107mL-1细胞溶于

6、含100mLL-1胎牛血清（FBS）的低糖DMEM（LGDMEM）培养液(GIBCO/BRL)备用.内毒素水平低的FBS批次选择：置55℃灭活1h，用于在琼脂糖凝胶上全骨髓细胞培养，1L含100mLL-1FBS的LGDMEM稀释后，置于75cm2培养瓶(Falcon)，3d后，移去一半培养液及未贴壁细胞，加入等量新鲜培养液，以后换液间隔为3~4d，细胞融合时收获细胞.收获细胞前移去培养基，用PBS洗两遍.然后用4mL的25gL-1胰酶和05mmolL-1EDTA(GIBCO/BRL)在37℃孵育20min.用8mL完全培养基终止消化.弃去仍贴

7、壁细胞，消化所获细胞（大部分来自克隆集落中心周围细胞）即为MSCs.500g离心15min收集的MSCs以(01～20)×107mL-1细胞浓度重悬于含100mLL-1FBS的LGDMEM培养基.1.3组织工程膀胱构建将收集的MSCs最终以106cm-2密度在BAMG的外表面上接种.12h后用于膀胱替代手术.1.4膀胱切除与重建新西兰兔手术麻醉为静脉给予苯巴比妥(30mgkg-1).腹部正中切口暴露膀胱，分离两侧输尿管.切开膀胱壁，暴露输尿管连接处，插入4F导管.实施膀胱次全切术，保留三角区，尿道内口，输尿管连接部，注意不要损伤输尿管.6只动

8、物三角区缝闭后不做任何处理（n=6，第1组，A）；7只单用BAMG替代原膀胱（n=7,第2组，B）；7只用组织工程膀胱（BAMG复合MSCs细胞）替代原膀胱(n=7