新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究

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1、新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究：严泉剑李六金张宇梅杨贵忠刘海军郭金龙王禾邵国兴【关键词】,骨髓基质细胞　　【Abstract】AIM:Toinvestigatethefunctionparametersoftissueengineeredbladdersarroalcells（MSCs）.METHODS：TheMSCsandthebladder-shapedaccellularorganspecificmatrix(BAMG)theNey.Theanimalslyassignedtothreegroups.

2、GroupA(n=6)underetryandradiographystudiesedserially.Animalsed.RESULTS：Theaveragetimeelapsedbetarroplantationofthetissue-engineeredneobladdersarkeddifferenceinbladderpliance(11%,104%,and107%respectively).Histologically,groupCshoalcellularorganizationconsistingofatr

3、ilayerofurothelium,submucosaandmuscle.TheGroupA,Bpresentedapatternofnormalurothelialcellsucosaandathinlayerofmusclefibers.CONCLUSION：OurstudydemonstratesthattheMSCscanbesuccessfullyusedinrabbitsbladderaugmentationsandreplacementbytissueengineeringtechniques.　　【Key

4、arroalcells;bladder;transplatation;tissueengineerig　　【摘要】目的:研究骨髓基质细胞（MSCs）在兔组织工程膀胱中的应用.方法:按文献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG)，从兔胫骨中分离出MSCs，体外扩增后接种于BAMG外表面，在低糖DMEM（LGDMEM）培养12h，与BAMG复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代.20只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术.实验随机分为3组.A组6只直接缝闭三角区；B组7只用膀胱形状的BAMG进行重建；C组7

5、只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术.术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料.12L10mmol・L-1PBS(pH70)和1g・L-1的叠氮钠搅拌6h使部分细胞溶解.在50mL含2000Kunitz单位DNA酶（Sigma）的1mol・L-1NaCl溶液中振摇14h,重复3次.然后在50mL40g・L-1去氧胆酸钠盐（含1g・L1叠氮钠）中振摇6h.获取的BAMG在PBS中洗3遍.4℃置于1g・L-1叠氮钠和100g}

6、39;L-1硫酸新霉素中储存.　　1.2MSCs分离培养全骨髓细胞获取（arroo龄实验用新西兰兔的胫骨穿刺点，即关节腔下10～25cm胫骨前缘处穿刺抽取骨髓［３］，注射器吹散，所获有核细胞计数.以(01~20)×107・mL-1细胞溶于含100mL・L-1胎牛血清（FBS）的低糖DMEM（LGDMEM）培养液(GIBCO/BRL)备用.内毒素水平低的FBS批次选择：置55℃灭活1h，用于在琼脂糖凝胶上全骨髓细胞培养，1L含100mL・L-1FBS的LGDMEM稀释后，置于75cm

7、2培养瓶(Falcon)，3d后，移去一半培养液及未贴壁细胞，加入等量新鲜培养液，以后换液间隔为3~4d，细胞融合时收获细胞.收获细胞前移去培养基，用PBS洗两遍.然后用4mL的25g・L-1胰酶和05mmol・L-1EDTA(GIBCO/BRL)在37℃孵育20min.用8mL完全培养基终止消化.弃去仍贴壁细胞，消化所获细胞（大部分来自克隆集落中心周围细胞）即为MSCs.500g离心15min收集的MSCs以(01～20)×107・mL-1细胞浓度重悬于含100mL・

8、;L-1FBS的LGDMEM培养基.　　1.3组织工程膀胱构建将收集的MSCs最终以106・cm-2密度在BAMG的外表面上接种.12h后用于膀胱替代手术.　　1.4膀胱切除与重建新西兰兔手术麻醉为静脉给予苯巴比妥(30mg・kg-1).　　腹部正中切口暴露膀胱，分离两侧输尿