金线莲组培快繁技术研究

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1、金线莲组培快繁技术研究江建铭，俞旭平，沈晓霞，沈宇峰【摘要】　　目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0mg/L＋6-BA0.5mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100

2、%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。　【关键词】金线莲；快速繁殖；增殖；生长；移栽　　金线莲Anoectochilusroxburghii（in，然后用流水冲洗30min。在超静工作台前，用75%酒精湿润5～6s，放入0.1%的HgCl溶液灭菌12～13min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA4.0mg/L+NAA0.4mg/L培养基上，pH5.6，蔗糖2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃，光照时间12h/d，光照强度1500

3、～2000lx。　　1.3不定芽诱导　　1.3.1基本培养基对不定芽诱导的影响　采用单因素实验，培养基选用MS（Murashige-Skoog）〔3〕，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VillerOjima）和KC(KnudsonC)等5种，分别添加6－BA4.0mg/L，NAA1.0mg/L。　　1.3.2激素对不定芽诱导的影响　以MS为基本培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。　　上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1～1.5cm，带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节，重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况，培养60d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.

4、2”项。　　1.4壮苗培养　　1.4.1激素对幼苗生长和发根的影响　以1/2MS为基本培养基，NAA设1～5mg/L5个处理，6－BA设0.5，1.0和1.5mg/L3个处理，共15个处理。　　1.4.2添加物对幼苗生长和发根的影响以1/2MS＋NAA2.0mg/L＋6－BA0.5mg/L为基本培养，考察马铃薯提取物、香蕉提取物、苹果提取物、椰子汁等4种天然有机物和活性炭对金线莲幼苗生长的影响。　　上述每种培养基均接入经增殖培养高约3cm，具3～4节间、有1～2片的无根幼苗，每处理接种接无根幼苗10株，重复3次。培养后每隔15d观察生长情况1次，至3个月考察每株净增加的叶片数、重量

5、及发根数，并进行数理统计分析。　　1.5移栽选苗高约6～8cm，茎基直径约2mm，丛生根有2～3条的试管苗，炼苗4d后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移人直径为15cm，装有不同基质的土盆中，考察不同基质对金线莲试管苗成活率的影响。移栽前，实验基质均用45%多菌灵可湿性粉剂800倍溶液浇透消毒。实验条件为遮荫度80%的荫棚，保持空气相对湿度的80%～90%。如发现有病死植株，及时拔除。每处理5盆，每盆种5株，重复3次，移栽3个月后考察成活株数，并进行数理统计分析。　　2结果　　2.1　无菌繁殖体系的建立实验表明，外植体茎段的分化程度对诱导结果存在一定的影响。从表1可知，上

6、、中段茎均能萌动生长。上段茎因有顶芽的存在，顶端优势表现较为强烈，因而以生长为主，不定芽发生较少，平均芽增殖数为0.6个；中段茎不定芽发生快、量大、长势好，平均芽增殖数为4.05个，并形成多枝丛生状。下段茎由于组织相对老化，虽有不定芽发生，但发生量与生长势均较弱。这和陈自力〔4〕报道的结果一致。　　从实验中观察到，不定芽的产生以侧芽萌生为主。一般在培养15～20d后，茎节上潜伏的叶腋芽萌动膨大，芽丛在节的四周萌出，起初为白色略带黄色，随着培养时间加长，芽不断伸展，逐渐转为黄绿色，形成主芽。叶腋芽是单生的，极个别节上能对生两个腋芽，未发现茎部或切口处长出不定芽。培养30d左右，主芽基

7、部的节再生侧芽(称一级侧芽)，45d左右一级侧芽节上又可发生二级侧芽，随着芽的生长、出现叶片，节处毛并产生根，外被浓密的白色绒毛，从而形成完整小植株。培养3个月后每天观察，侧芽分生组织的增殖，一般只出现主芽和一二级侧芽或苗；培养5个月以上，主芽、侧芽较高，叶片较多、大，只有少数出现三级侧芽或苗。这种腋芽萌生的增殖形成了主轴分枝型的芽苗，随培养时间或继代繁殖代数的增加，或激素的作用，芽或苗因节间短，多数为形成似不定芽或丛生苗。培养过程中，未见愈伤组织，也没有发现有原球茎