金线莲组培技术.doc

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1、金线莲组培技术2012-09-04木文行家：张淸国II的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体,开展『茎段不同部位、培养基、激索、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响硏究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的屮间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0mg/L+NAAO.5-1.Omg/U两个月增殖倍数达5.0以上:壮苗般适培养基为1/2MS+NAA3.0mg/L+6-BA0.5mg/L+香蕉提取物20%总者所研发的金线莲产品图片3H的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同

2、部位、培养基、激索、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗牛长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的屮间段茎节为好;不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0mg/L+NAA0.5〜1.0mg/L,两个月增殖倍数达5.0以上壮苗最适培养基为1/2MS+NAA3.0mg/L+6-BA0.5mg/L+香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份+2〜3mm粗砂2份（或1份）+木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%,且牛长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。【关键词

3、】金线莲；快速繁殖；增殖；牛长；移栽金线莲Anoectochilusroxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年牛草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血床病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药屮之王”[1,2]o金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，口然萌发率和繁殖率低，忖前市场上货

4、源主要来自于野牛采挖，产品一直处于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，対金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野牛资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野牛资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。1材料与方法1.1材料无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野牛种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。1.2无菌繁殖体系的建立取牛长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水屮漂洗3〜5min,

5、然后用流水冲洗30min。在超静工作台前，用75%酒精湿润5〜6s,放入0.1%的HgCI溶液灭菌12〜13min,用无菌水冲洗5〜6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、屮段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5〜2cm,带有1〜2个节间的小段，分别接种于M96—BA4.0mg/L+NAA0.4mg/L培养基上,pH5.6,蔗糖2.5%,琼脂0.7%o培养条件为：温度（25±2）°C，光照吋间12h/d,光照强度1500〜2000IXo1.3不定芽诱导1.3.1棊本培养棊对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS（MurQshig

6、e-Skoog）[3],1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW（Vacin&Went）,B5（Gamborg-Miller&OjimQ和KCXKnudso门0）等5利

7、,分别添加6—BA4.0mg/L,NAA1.0mg/L01.3.2激索对不定芽诱导的影响以MS为基木培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂索和牛长素。上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1〜1.5cm,带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节,重复3次。培养期间定时观察不定芽牛长情况，培养60d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。1.4壮苗培养1.4.

8、1激索对幼苗牛长和发根的影响以1/2MS为基木培养基，NAA设1〜5mg/L5个处理，6-BA设0.5,1.0和1.5mg/L3个处理，共15个处理。1.4.2添加物对幼苗牛长和发根的影响以1/2MS+NAA2.0mg/L+6—BA0.5mg/L为基本培养，考察马铃薯提取物、香蕉提取物、苹果提取物、椰子汁等4种天然有机物和活性炭对金线莲幼苗牛长的影响。上述每种培养基均接入经增殖培养高约3cm,具3〜4节间、有1〜2片的无根幼苗，每处理接种接无根幼苗10株，重复3次。培养后每隔15d观察牛长情况1次，至3个月考察每株净增加的叶片数

9、、重量及发根数，并进行数理统计分析。1.5移栽选苗高约6〜8cm,茎基直径约2mm,丛牛根有2〜3条的试管苗，炼苗4d后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移人直径为15cm,装有不同基质的土盆屮，考察不同基质对金线莲试管苗成活率的影响。移栽前，实验基质均