人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化论文

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1、人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化论文何念海，赵文利，王宇明【关键词】,骨髓间充质干细胞【Abstract】AIM:Toestablishandoptimizetheinductionanddifferentiationconditionforhumanfetalmarroesenchymalstemcell(MMSCs)differentiationintohepatocytelikecells,observethedifferentiationprocedureandidentifythephenotypesofMMSCs.M

2、ETHODS:MMSCs,isolatedfromfetalmarroarkerssuchasALBandCK18easuredmunohistochemistry.RESULTS:Cellsincontrolgroupkeptthelongspindleshape,allsize,proliferatedquickly,submittedtypicalfibroblastboyancygroountofgranulesincreased,andthereon.Cellsatrixkeptlongspindleshapegroatrixchanged

3、fromlongtoroundinshapeandshapeagentreduced.AZApretreatmentinhibitedthecellhyperplasia,andcellchangedfromlongtoshortinshape.PDGFBBpretreatmenthadnoinhibitiontocellproliferation,andcellsbranchedeasily.Immunohistochemicalstaininginalltheinductiongroupsshoculturecondition,highratio

4、hepatocytelikecellsininducedMMSCscanbeobtainedbytheconditionofinductiongroup4:inatrix,MMSCsarepretreatedmol/LAZAfor10-12h,andHGF10μg/L＋FGF410μg/L,usedaspromoters,areaddedintoHGMmedium.【Keyarroesenchymalstemcells;hepatocytelikecells;celldifferentiation;induction【摘要】目的：建立和优化骨髓间充质

5、干细胞(marroesenchymalstemcells,MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定.方法：采用体外分离培养的MMSCs为研究对象，设计不同的诱导分化条件进行体外诱导，观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性，应用免疫组化检测肝细胞标志ALB和CK18的表达，建立人胎儿MMSCs向类肝细胞分化的优化条件.结果：未进行诱导的对照组细胞保持长梭型，形状因子4.5±1.0.freelmol/LAZA预处理10～12h，HGF10μg/L＋FGF410μg/L+HGM培养基可获得高比例的类肝细胞.【关键词】骨髓间充质干

6、细胞；类肝细胞；细胞分化；诱导0引言骨髓间充质干细胞(MMSCs)是能分化为不同细胞和组织类型的多潜能细胞，是细胞移植的理想来源.最近研究发现体内移植骨髓细胞可发育为肝细胞［1-5］.因此，骨髓细胞有治疗急慢性肝功能衰竭的潜能.我们采用体外培养的人胎儿MMSCs为研究对象，设计不同的诱导分化条件进行体外诱导，观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性，应用免疫组化检测肝细胞标志的表达，以建立人胎儿MMSCs向类肝细胞诱导分化的优化条件.1材料和方法1.1材料采用体外细胞分离培养方法从人胎儿骨髓获得MMSCs.均签署知情同意书.1.2方法1.2

7、.1分组对照组：无基质，MEM培养基，20g/LFBS培养.诱导1组：无基质，HGM培养基，20g/LFBS培养.诱导2组：无基质，HGM培养基，HGF40μg/L，FGF440μg/L诱导.诱导3组：10g/LMatrigel作基质，HGM培养基，HGF10μg/L，FGF410μg/L诱导.诱导4组：10g/LMatrigel作基质，HGM培养基，2.5mmol/LAZA和20g/LFBS预处理10～12h，HGF10μg/L，FGF410μg/L诱导.诱导5组：10g/LMatrigel作基质，HGM培养基，PDGFBB10μg/L，EGF10

8、μg/L和20g/LFBS预处理10～12h，HGF10μg/L，FGF410μg/L诱导.1.2.2诱导过