lcmsms农药一齐分析法(ⅱ)

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1、1.适用范围适用于LC/MS/MS农药的一齐分析法（Ⅱ）中农药的检测。2.编制依据依据日本厚生劳动省《LCMS农药一齐分析法Ⅱ》编制。3.方法原理水果、蔬菜、加工产品中的农药残留经乙腈提取，提取溶液经净化、浓缩用50%的甲醇定容后，LC/MS/MS测定，用外标法定量。4.试剂4.1乙腈：色谱级4.2丙酮：色谱级4.3正己烷：色谱级4.4乙酸乙酯：色谱级4.5无水硫酸钠：分析纯4.6甲苯：色谱级4.7甲醇：色谱级4.8氯化钠：分析纯4.90.01M盐酸：8.29ml浓盐酸定容至1000ml5.仪器设备5.1WatersUPLCTQD5.2食品加工器5.3菜刀，案板5.4电子天

2、平5.5均质机5.6布氏漏斗，分液漏斗，普通漏斗，滤纸5.7梨形瓶（250ml，100ml）5.8锥形瓶（200ml，100ml）5.9C18固相萃取柱（1G6ml）5.10氨基复合柱（Carbon/NH2500mg6ml）5.11硅胶柱Silica（500mg6ml）5.12旋转蒸发仪5.13氮吹仪5.14玻璃离心管（10mL）5.15分液漏斗振荡器5.16真空泵5.17移液枪（1mL，200μL）6.分析步骤6.1试料的制备：（除不加样品外，试剂空白与样品同步处理）24将送交实验室的不少于500克的样品于食品加工器搅细（对于大块状的样品可先用水果刀切成小块，再放于食品加

3、工器中搅细）。粉碎后的样品装于一次性的塑料袋中备用。6.2提取6.2.1准确称取10.0g（精确到0.1g）搅细的样品（原料称取20.0g）于均质杯中，加入70ml乙腈，在高速组织捣碎机中均质5min。6.2.2将样品减压抽滤，用30ml乙腈冲洗均质杯，也过滤，合并滤液。6.2.3将滤液倒入装有7gNaCl的300ml分液漏斗中，用20mL0.01M盐酸冲洗三角瓶，也倒入分液漏斗中，在分液漏斗震荡器上剧烈震荡10min，静置10min，使乙腈相和水相分层。6.3浓缩准确移取全部上层清液于茄形瓶中。在40℃水浴锅中旋蒸至大约20ml。6.4净化6.4.1用乙腈10mL活化固相

4、萃取柱（BE-C18）；将约20ml样品液过萃取柱后，用3mL乙腈冲洗容器，并作为溶出液过柱子，溶出液约23ml用三角瓶接收；6.4.2加无水硫酸钠3-4勺干燥，静置（约15min）；过滤，用40mL乙酸乙酯（10~20ml×2~3回）洗涤三角瓶，过滤，合并滤液；6.4.3将滤液在40°C下减压条件下浓缩，至近干；用3mL丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解。6.4.4将ENVI-CarbLC-NH2和Sep-pakVacSilica固相萃取小柱串联依次用5ml甲醇、5ml丙酮、10ml正己烷润洗，倒入样品的丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解液，再用1

5、0mL丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）冲洗茄形瓶，亦倒入。用2mL丙酮：甲醇（1：1）冲洗样品瓶，倒入萃取柱，收集，再将18mL丙酮：甲醇（1：1）倒入萃取柱，收集。6.4.5将滤液在40°C下减压条件下浓缩，至近干；用5mL50%的甲醇水溶液溶解，超声溶解，取1.5ml于1.5mLEP管中10000rpm，10min，离心，取上清液过0.22μm尼龙滤膜，过滤，移入样品瓶中待测。7.分析条件7.1UPLC条件WatersACQUITYUPLCl移动相A5mM醋酸铵（AcNH4）水溶液B5mM醋酸铵（AcNH4）甲醇溶液l色谱柱24ACQUITYUPLCBEHC1

6、81.7μm（2.1mm*100mm）l温度色谱柱温度40℃l样品柜温度温度5℃l泵（LC梯度程序）流速0.3mL∕minTime(min)A(%)B(%)0.0901011.5356513.059514.559514.69010RunTime17.5l进样量注入量5μL（部分环针溢出进样）7.2MS条件lLC/MS/MS仪器条件TQDetectornCapillary0.50kVnCone-nExtractor3VnRFLens0.1VnSourceTemp150℃nDesolvationTemp400℃nDesolvationGasFlow900L/hrnConeGas

7、Flow50L/hrnLMResolution111.0nHMResolution111.0nCollisionGasFlow0.15mL/min24震荡10分钟，静置分层，取乙腈层（上层）3mL丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解过柱，再用10mL冲洗容器过柱，过柱液不收集超声溶解，过萃取柱依次用5ml甲醇、5ml丙酮、10ml正己烷润洗固相萃取柱ENVI-CarbLC-NH2和Silica小柱净化滤液在40°C下减压条件下浓缩至近干三角瓶中加无水硫酸钠3-4勺干燥约15min后过滤溶出液约23ml用三