微生物检测-防腐效能试验

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1、微生物检测四、防腐效能试验　　防腐效能试验又称“挑战性试验”，它是用来测定防腐剂有效抗菌的最低浓度，所有的化妆品在生产和消费者使用过程中都面临着受到微生物污染的可能。因此在化妆品中常添加不同种类的防腐剂来防止微生物的大量繁殖。大多数的化妆品不能认为是无菌产品，因为制造它们的原材料不是无菌的，在生产过程中没有采用无菌程序，没有灭菌过程，而且常常装在多次使用过的包装容器内，这就可能造成了微生物的污染。产品中细菌、酵母菌、霉菌的生长依赖于产品中适于微生物生长的营养成分和物理化学因素，包括水分活度（a）、产品中的营养素、储存的温度、防腐剂的存在等。当有足够的水分和营

2、养成分存在时，液体产品除非有适宜的防腐剂存在，否则微生物将会迅速繁殖，化妆品中防腐剂的存在减少了液体化妆品中微生物生长和脱水化妆品中微生物存在的几率。脱水产品如矿物油、眼影、粉底等在反复使用过程中都有被污染的可能；但是由于它们没有微生物生长所必需的水分，因此微生物的繁殖速率相对较低。产品的微生物污染是多种多样的，最严重的微生物污染是致病性微生物的污染，如致病性微生物金黄色葡萄球菌或条件致病性微生物绿脓杆菌或白色念珠菌的污染，在消费者的使用过程中就会对消费者造成极大的危害。非致病性微生物的污染一般不会对消费者造成生命威胁，然而很高浓度的微生物的污染如达到10的

3、五次方个ml，会引起产品的变质（在颜色、气味、香味、透明度等方面），导致产品不能使用。　　（一）防腐效能试验的必要性　　使用污染了的产品会给消费者造成健康威胁。防腐剂的作用在于对化妆品制造过程和消费者使用过程中的微生物污染进行预防，防腐效能试验就是在产品配方的确定中测定防腐剂能起到防腐作用的防腐剂的最低浓度。有许多试验的标准可以评估一个产品的配方是否具有有效的防腐效能。产品中加入防腐剂量的多少非常重要，因为（1）防腐剂的量添加太少，会使微生物繁殖而引起污染；（2）防腐剂的量太大，会引起皮肤不适（如产生皮疹、灼烧、皮肤变红、发痒等）或过敏；（3）防腐剂使用过量

4、会使产品成本增加，这无疑会加重消费者负担、通过防腐效能试验，可以选择既能有效抑菌又可以使产品安全、稳定，且使用起来愉快舒适的化妆品中防腐剂的最低浓度。（二）防腐效能试验方法要点　　目前化妆品生产制造企业或研究机构所使用的防腐检测方法主要有CTFA、ASTM（美国检验方法及材料协会），USP（美国药典）和英国药物学方法；我国使用中华人民共和国化妆品微生物标准检验方法（GB7978.1-87）。另外，还有快速检测法，如线性回归法和加速防腐试验方法。上述试验具有一些相同的特性，如：测试的微生物种类和恢复系统、测定APC方法均相同。这些方法的主要区别在于培养温度、接

5、种物的制备程序和培养时间的不同。这些方法的不同导致了试验结果的差异和执行标准的不同，但在具体使用任何一种方法时，都应有适当的有效性统计学方法加以支持，以使方法更有效、更准确。上述方法各具优点，当然，美国分析化学家协会AoAc正在根据上述方法寻找一种新的更实用的方法。综合以上各种方法，进行防腐效能测试应考虑以下几个方面：（1）检验所用的时间；（2）方法的可靠性；（3）使用统计学方法处理数据的可靠性；（4）被检测产品的类型；（5）被测试的微生物种类；（6）使用纯培养或混合培养物；（7）配方中其他抗菌剂的协同效应；（8）成功的标准。　　（三）检测方法　　1.CFF

6、A方法　　列出了用于化妆品防腐效能试验中的常用微生物，其中包括了与眼部有联系的细菌，这些细菌是从眼部区域天然存在的微生物区系，或从临床上分离出来的，或从污染的产品中分离获得的。防腐效能试验中常用的细菌培养基包括NA、TSA(水解大豆琼脂培养基）、EA(琼脂培养基）。适宜于真菌生长的培养基包括SDA(糊精琼脂培养基）、PDA(马铃薯琼脂培养基）或MA(琼脂培养基）。当菌体生长好后，可将细菌或酵母菌于5℃下斜面保存，霉菌可在室温下斜面保存。每隔一定时间（一周或一个月）进行传代来保持菌种的生存，但频繁传代会使菌种的某些特性丢失或减弱微生物的抗性，冷藏或冷冻干燥保存

7、微生物是一种取代斜面保存的方法，因为它克服了频繁传代的缺点，保证了遗传性状的稳定性。还应注意的是在没有选择压力的情况下由于频繁传代抗性更易丧失。在含有防腐剂的化妆品中分离出来的微生物，可能仍然保留着对防腐剂的抵抗力。在准备接种物时，可以用肉汤或琼脂培养基培养细菌和酵母菌，收获的菌体用于微生物检验。在进行微生物检验时，一般取20g或20ml样品，微生物的接种浓度控制在1×10cfu细菌ml（或g）产品，或1×10cfu酵母菌ml（或g）产品。为了获得每种或每一类群微生物的试验数据，CTFA倾向于使用纯培养物或相当类似的微生物来接种，体积不应超过总体积的1%，这

8、些检验水平提供了比通常消费者使用可能性更高的细菌污染