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时间：2018-05-12
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1、重组DNA的基本步骤重组DNA的基本步骤获得目的基因DNA分子的体外重组重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定获得目的基因的途径限制性内切酶酶切产生待克隆的DNA片段人工合成DNA反转录酶酶促合成法聚合酶链(式)反应扩增特定的基因片段这样就可以用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段，对于原核生物比较小的基因组来说，可以直接用标记地探针来获取在通过特定的方法，对于比较大的基因组，可以先制作基因文库，然后钓取所需要的带有目的基因的片段。限制性内切酶对DNA的切割方式有两种，一种切割方式是完全酶切，另一种方式为部分酶
2、切。体外重组连接常用的方法1黏性末端连接法2平齐末端连接发平齐末端连接法： 用化学合成法、逆转录酶酶促合成法获得的DNA片段或cDNA片段，以及某些限制酶酶切产生的DNA片段，称为平齐末端。固然平齐末端可用T4DNA连接酶连接，所需底物的浓度高，效率低。因此通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接。改造的方法是加人工接头或结尾这一过程分为两个步骤1重组DNA引入宿主细胞2重组体克隆的筛选与鉴定谢谢观看
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