DNA重组的基本工具

《DNA重组的基本工具》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、定向基因改造设想设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三别名操作环境操作对象操作水平优点原理基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平什么叫基因工程？P定向改造生物性状基因重组【大胆设想】利用转基因技术如何让细菌“吐出”蚕丝？识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。1、来源：2、种类：3、作用：4、结果：形成两种末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶黏性末端平末端1、来源：2

2、、种类：限制酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？什么叫黏性末端？判断：图中形成黏性末端的过程形成____个切口，断裂了____个磷酸二酯键12SmaⅠ平末端　　　平末端什么叫平末端？P5图1-31.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？____个切口，产生_____个黏性(平)末端。2.如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生_____的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。思考24相同P7思考与探究1，P4

3、寻根问底二、ＤＮＡ连接酶——“分子缝合针”１.作用：２.DNA连接酶的种类3.与DNA聚合酶作用相同吗？可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链将DNA

4、双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板DNA分子复制的过程1.载体的作用是什么？2.作为载体需要具备什么条件？可以从以下几个方面思考：①作为载体没有切割位点将怎样？②假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？③目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？④如果载体对受体细胞有害将怎样？3.质粒是什么？三、载体—“分子运输车”（阅读P6）【作业】P6重组DNA分子的模拟制作（材料自备，立意自选）--交成品没买课本的下周买来可以买一本教辅资料（新课）【例】根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型

5、有_______和______。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是_____________________________________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即______DNA连接酶和_____DNA连接酶。黏性末端平末端切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ产生的相同(4)基因工程除质粒外，_______和______也可做载体。(5)请画出质粒被切割形成黏性末端

6、的过程----GGATCC----噬菌体动植物病毒2.载体的条件能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；有切割位点有遗传标记基因对受体细胞无害、容易分离比较容易得到3.常见的载体1.作用1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）同种限制酶B.两种限制酶同种连接酶D.两种连接酶A练习2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。3.基因工程是在DNA

7、分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C练习小结基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有专一性(识别序列)切开DNA分子的磷酸二酯键DNA连接酶连接磷酸二酯键种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶运载工具具备的条件结构简单,大小适中能在宿主细胞中自我复制并稳定存在具一个多个限制酶切位点具标记基因质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒