dna重组技术的基本工具

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1、专题1.1DNA重组技术的基本工具学习目标1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。同步学案1.基因工程又称为技术或技术。在体外将基因经“剪切”和“拼接”后，导入受体细胞内进行，使在受体细胞内表达，产生出人类所需要的或创建新的生物类型。【答案】基因拼接、DNA重组、外源、无性繁殖、重组、基因产物2.基因操作的工具（1）基因的剪刀：，主要存在于中，特点：具有，功能：能够识别双链DNA分子的某种核苷酸序列，并且使每一条链中部位的两个核苷酸之间的断开，因此具有。大多数限制

2、酶的识别序列由个核苷酸组成。（2）基因针线：，其作用是将两段乃至数段DNA片段拼接起来的酶，主要是把两个之间的缝隙“缝合”起来。分类：根据酶的来源不同，可分为两类：一类是从中分离得到的，称为；另一类是从中分离出来的，称为。两种DNA连接酶的比较：相同点：都缝合键。区别：E·colDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的之间连接起来，而不能将双链DNA片段之间进行连接；而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的，又可以“缝合”双链DNA片段的。但连接平末端的之间的效率较。（3）基因的运输工具：，具备条件:对受体细胞的

3、没有决定作用，能在受体细胞内，并稳定保存,具有切点，便于的连接，具有某些，便于筛选、检测、常见的运载体有。【答案】（1）限制性内切酶、原核生物、专一性、特定、特定、磷酸二脂键、专一性、6（2）DNA连接酶、黏性末端、大肠杆菌、E·colDNA连接酶、T4噬菌体、T4DNA连接酶、磷酸二脂、黏性末端、平末端、黏性末端、平末端、低（3）运载体、生存、复制、多个限制酶切点、目的基因、标记基因、动植物病毒、土壤农杆菌、大肠杆菌3.基因工程中，限制性内切酶切质粒，个切口，个黏性末端，限制性内切酶切取目的基因个切口，个黏性末端。【答案

4、】一、两、两、两4.运载体的条件之一是含种酶的切点，而不是含种酶的切点。【答案】多种、一个、一种、多个1.基因剪刀－限制性内切酶（微生物中）特点：一种限制性内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并能在特定的切点上切割DNA分子。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。①画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。知识与技能答：—G↓GATCC——CCTAG↑G—用酶Ⅰ切割—G—CCTAG—GATC—G—②画出目

5、的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。答：2.基因的针线－DNA连接酶：作用是把两条DNA末端之间的缝隙“缝合”起来。（1）分类连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·colDNA连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4DNA连接酶。（2）作用这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口（nick），而不能连接单链DNA。（3）DNA连接酶连接的是什么部位？DNA连接酶是将一段DNA片段3′端的羟基与另一DNA片段5′端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。3

6、.基因的运输工具－运载体（1）作用：将外源基因导入受体细胞（2）特点：能在宿主细胞内复制并稳定地保存；具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选。（3）作为载体必须具备以下条件：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存，具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。（4）举例：经常使用的有质粒、噬菌体和动植物病毒等。注意：区分题目中的“工具”和“工具酶”典例精析例1下列关于质粒的叙述，正确的是（）A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一

7、种颗粒状细胞器B.质粒是细菌细胞质中能够自主复制的小型环状DNA分子C.质粒只有在导入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制D.细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的【解析】从两个方面分析，（1）质粒是一个小型环状DNA分子，它可以进入细菌细胞，存在于细胞内，但它不是宿主细胞的细胞器；（2）质粒是一个重要的运载体，通常利用质粒与目的基因结合，形成重组质粒。【答案】B变式练习1基因工程中可用作载体的是（）①质粒②噬菌体③病毒④动物细胞核A.①②③B.①②④C.②③④D.①③④【答案】A例2镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因

8、的碱基序列发生了改变。检测这种碱基序列改变必须使用的酶是（）A.解旋酶B.DNA连接酶C.限制性内切酶D.RNA聚合酶【解析】选项B,D可以直接排除。对于选A可能理解为的：既然是检测突变的部位,那么很自然想到用该基因的探针，进行碱基互补配对杂交而检测之(相关知识见教材鉴定人猿亲缘关系和基因工程处都有所涉