荨麻提取物对5α的论文

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1、荨麻提取物对5α的论文作者：冀保全杨爱岗朱永宁逄越唐玲冯宝民王永奇【摘要】　　目的研究荨麻提取物中水溶性成分的5a-还原酶抑制活性。方法基于荧光测定的方法，建立一种5a-还原酶抑制剂体外模型，从大鼠前列腺组织中提取5α-还原粗酶,与底物睾酮（testosterone）以及供氢体还原型辅酶ⅱ（nadph）共同组成了一种微量反应体系。利用荧光测定仪检测nadph的含量，以荧光的强弱来判断5a-还原酶的活性，以非那雄胺作为阳性对照。结果同对照组相比，反应体系中加入荨麻提取物后荧光值有显著升高。结论荨麻根的水溶性成分在体外能够抑

2、制5a-还原酶的活性。【关键词】5α-还原酶荨麻双氢睾酮前列腺增生　　abstract:objectivetostudythe5α-reductaseinhibitoryactivityoftheaqueousconstituentsinurticafissae.pritz'sectract.methodsthe5α-reductaseinhibitor'smodelinvitroincludedamini-reactivesystemtheprostatesofmalerats,testosterone(asasubs

3、trate)andnadph(asahydrogensupplier).theconcentrationofnadpheasuredbythefluorescenceexaminination.thespecificityof5α-reductasearkablyhigherthanthereferencegroup.conclusiontheurticafissae.pritz'saqueousextractcaninhibittheactivityofthe5α-redutaseinvitro.　　keyercksh

4、arpdohme(u.k.)ltd。批号j20050041；睾酮，上海久邦化工公司产品，批号20051106；nadph，biosharp公司产品，批号041939；其他化学试剂均为国产分析纯。　　1.2仪器荧光检测仪（型号：fp-6500，jasco公司）；台式高速冷冻离心机（型号:biofugeprime，rheraeus公司）；alpha1-4型冷冻干燥机（christ公司）；数显恒温水浴锅（型号：hh-2，常州国华电器公司）。　　2方法　　2.1还原酶的制备［6］雄性sd大鼠3只［体重(200g±10)g大连医科

5、大学实验动物中心提供］，禁食不禁水过夜后处死，迅速取腹侧的前列腺组织在冰台上剪碎，用预冷的匀浆液(蔗糖0.73mol/l，氯化钙1.91mmol/l)在玻璃匀浆器中匀浆［7］，在4℃下以10000r/min高速离心20min，取上清液再以16000r/min低温高速离心30min，即为5α-还原酶提取物，采用lol的小试管，将底物、酶提取液,辅酶等反应成分依次加入，然后加入缓冲液（pbs2.0mmol/l,蔗糖0.2mol/l,edtana21.0mmol/l,ph6.8）至2ml，在37℃下反应1h。然后用荧光检测仪测

6、定反应体系的荧光值。为了获得最佳酶活性测定反应参数，对反应温度、底物、酶的浓度以及反应时间的反应条件进行优化，同时以特异性5α-还原酶抑制剂非那雄胺［8,9］作为阳性对照。　　2.3荨麻提取物的制备和活性研究取荨麻根50g，粉碎成1cm的小段，室温下用水浸泡12h，将提取液过滤浓缩后，加乙醇至浓度达到80％（去除小分子成分，避免荧光干扰），沉淀冷冻干燥后配制成2mg/ml溶液，按照“2.2”的操作向酶反应体系中加入(最终浓度0.1mg/ml)，酶促反应后测定其荧光值。　　3结果　　3.1辅酶浓度和荧光测定条件辅酶nadp

7、h浓度为1mmol/l，荧光仪测定条件：激发波长340nm；吸收波长461nm；狭缝宽度3nm；响应时间0.5s。　　3.2睾酮浓度对酶活性的影响在固定酶提物浓度（1.2mg/ml）和辅酶nadph的浓度（1mmol/l）的条件下，逐步增加睾酮浓度，分别是：0.1，0.2，0.5，2.0，20.0μmol/l和200μmol/l，在37℃条件下反应1h，测定荧光值。如图1所示，当底物浓度在0～0.5μmol/l时，随着睾酮浓度变大，荧光值降低，但当底物浓度增加10倍，100倍时，荧光值不再变化，说明当睾酮浓度到0.5μm

8、ol/l时，即可获得较高的酶活性。　　3.3酶提取物浓度对酶活性的影响确定底物和nadph浓度以后，考察反应体系所需的酶量，以总蛋白含量表示5α-还原酶提取物含量，用缓冲溶液稀释成一系列浓度，浓度分别为：0.3，0.6，1.2，1.8，2.4mg/ml，在37℃条件下反应1h后测定荧光值。如图2所示，随着酶量的增加，