滇藏荨麻提取物的5α还原酶抑制活性的研究

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1、滇藏荨麻提取物的5α还原酶抑制活性的研究作者：王炜冀保全唐玲史丽颖冯宝民王永奇【摘要】　　目的研究滇藏荨麻提取物各极性部位的5α-还原酶抑制活性。方法基于酶联免疫方法，建立抑制5α-还原酶体外模型，从大鼠前列腺组织中提取5α-还原酶，与底物睾酮以及供氢体NADPH共同组成了一种微量反应体系。利用酶标仪检测双氢睾酮(DHT)的含量。以DHT的含量来判断5α-还原酶的活性，用非那雄胺做阳性对照药。结果滇藏荨麻根95%乙醇提取物的正丁醇萃取物具有显著的抑制5α-还原酶的活性。结论滇藏荨麻根95%乙醇提取物的正丁醇萃取物为抗BPH的有效部位。【关键词

2、】5α-还原酶滇藏荨麻双氢睾酮前列腺肥大酶联免疫　　Abstract：ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectofallkindsofconstituentsinUnticamairEiLevl'sextracton5α-reductaseactivity.MethodsThe5α-reductaseinhibitor'smodelinvitrotheprostatesofmalerats,testosterone(asasubstrate)andNADPH(asahydrogensupplier).Theconc

3、entrationofDHTeasuredbyELISAcouldshoe.Thespecificityof5α-reductaseairEILevl'srootsarkably.Conclusionn-butanolextractantintheextractofUnticamaireiLevl'srootsaireiLevl；Dihydrotestosterone(DHT)；BenigeprostaticHyperplasia；Enzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)　　良性前列腺肥大症(BenignPro

4、staticHyperplasia,BPH)属于常见男性疾病之一。据临床医学统计数字表明BPH为多发病之一。50岁以上的男性中BPH的发病率约为40%～50%，65岁以上男性中BPH的发病率高达60%～65%,而70岁以上约90%［1,2］。患有BPH症的病人,因肥大的前列腺组织压迫尿道而引起小便不畅,排尿困难,尿频尿急,尿液残留等症状，更严重者甚至会引起尿潴留,必须进行插管导尿术,病人十分痛苦。　　目前,荨麻制剂在国外,特别是在德国已被广泛应用。大荨麻UnticadioicaL.根提取物不仅用于BPH的治疗,也用于预防［3］。大荨麻作为天然药

5、物治疗BPH，为避免手术及西药的副作用提供了新的安全可靠的途径［4，5］。　　我们曾对国产的8种荨麻属植物根的不同提取物进行了抗BPH的筛选，结果表明滇藏荨麻UnticamaireiLevl.和荨麻UnticafissaPritz.根的20%和95%乙醇提取物具有强的抗BPH的作用［3］。为了进一步明确其有效部位，我们以5α-还原酶为作用靶点，采用酶联免疫法(ELISA)，对滇藏荨麻根的95%乙醇提取物进行了梯度极性溶媒萃取，并对不同极性组分进行了抑制5α-还原酶的活性研究。　　甾体5α-还原酶是定位于靶细胞微粒体上的膜蛋白，依赖还原型辅酶II

6、(NADPH)作为供氢体，不可逆地催化睾酮（T）转化为生理活性更强的双氢睾酮（DHT）［6］，DHT被认为是BPH的主要病因。抑制酶活性，减少DHT的生成，已成为非手术治疗BPH的主要途径。　　本次实验首先建立反应体系，利用生成的DHT与HRP(辣根过氧化物酶)标记的DHT竞争结合酶标板上的抗DHT抗体，通过颜色反应所测定的吸光值，最终换算为DHT的浓度，从而考察不同组分对5α-还原酶活性的影响。　　1材料　　1.1药品与试剂非那雄胺（保列治），MerckSharpDohme(U.K.)Ltd，批号J20050041；睾酮，上海久邦化工公司，批

7、号20051106；NADPH，Biosharp公司，批号041939；DHT双氢睾酮试剂盒ADL公司，批号10-9031；其他化学试剂都为国产分析纯。　　1.2仪器酶标仪(型号：RT-2100C，深圳雷社生命科学股份有限公司)；数显不锈钢电热培养箱（型号：HPX-9272MBE，上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；台式高速冷冻离心机（型号：Biofugeprime，RHeraeus公司）；ALPHA1-4型冷冻干燥机（CHRIST公司）；微量振荡器（型号：MODELMM-1上海无线电仪器厂）；数显恒温水浴锅（型号:HH-2常州国华电器公司）。　

8、　2方法　　2.1还原酶的制备雄性SD大鼠3只，体重（200±10）g，大连医科大学实验动物中心提供），禁食不禁水过夜处死，迅速取出腹侧的前列腺组织在