实验性脑出血大鼠脑组织形态学的动态变化

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1、实验性脑出血大鼠脑组织形态学的动态变化：王丹，李平友，郑勇，柯岩，段丽欢，王秋桂，殷妮娜，陈业文【摘要】目的研究大鼠脑出血后神经元改变及胶质增生的动态变化特征以及变化规律对行为学的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、出血组（分12h组、24h组、48h组、72h组4个时相组，每组5只）。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型，通过对脑血肿周围脑组织坏死神经元计数和Longa行为学评分，动态观察各组大鼠脑血肿周围组织形态学的变化及神经功能状态。结果脑出血组12h即出现血肿周围脑组织部分神经元变性坏死，少数炎性细胞浸润，48h达高峰，72h后可见血肿周围胶质细胞、血管增生

2、。脑出血组各时点的神经功能障碍评分均高于正常对照组和假手术组（P均<0.05）。结论脑出血后神经元变性、坏死，胶质细胞和血管增生可能是脑水肿加重和病情加重的主要原因之一；神经行为学变化与神经元病变及神经胶质细胞的增生性反应之间存在明显相关。【关键词】脑出血；形态学；行为；大鼠ABSTRACT:ObjectiveTodynamicallyobservetheneuronalchangesandgliosishyperplasiainperihematoma，andthebehavioralchangesafterIntracerebralHemorrhage(ICH)inrats.M

3、ethodsTheSDratsoperationgroupandICHgroup.AlltheratsoftheICHgrouporhagemodelatoma.ResultsSomeneuronsdisplayednecrosisandfematorycellsatomaregionat12hoursafterICH,reachedtothetopat48hours.At72hoursafterICHgliosisandcapillaryhyperplasiaatoma.NeurobehavioralscoresatvariousstagesinICHgroupgroup（P<0

4、.05）.paredorrhage;Histomorphology;Behavior;Rat脑出血(intracerebralhemorrhage,ICH)是自发的非外伤性脑实质内出血。其发病率高、死亡率高、致残率高[1]。ICH后脑水肿形成是导致脑损伤的重要环节。急性期血肿扩大和脑水肿是导致ICH病情加重的主要原因，控制继续出血和减轻脑水肿是治疗ICH的关键。但水肿的发生和发展机制目前仍不清楚。探讨ICH规律及其机制，对临床上治疗和控制病情的加重至关重要。为此，我们应用脑立体定向技术，用大鼠自体动脉血建立脑出血模型，动态观察其行为学及血肿周围脑组织形态学变化。1材料和方法1.1实验仪器

5、江湾Ⅱ型立体定向仪；微量注射器；显微外科手术器械；牙科钻；德国leica（RM2245）石蜡切片机；Motic（BA300）数码摄像系统和olympus（CH2）生物显微镜。1.2实验动物及分组健康成年SD雄性大鼠60只，体质量220～250g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供（SCXK鄂20042007），以标准饲料喂养，饮用纯净水，恒温(20℃～25℃)。随机分为正常对照组（n=20）、假手术组(n=20)、出血组(ICH组,n=20)。其中ICH组分为12h、24h、48h、72h等4个时点，每个时点5只大鼠。1.3大鼠尾状核脑出血模型建立参照Lee的方法[2],大鼠经1

6、0％水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯卧位固定于立体定位仪上，于前囟前0.5mm中线右旁开3.0mm处用牙科钻钻一直径为1.0mm的小孔,用微量进样器（针管肝素化）经右侧股动脉抽取血液50μl，立即于立体定位仪上沿钻孔进针，进针深度6.0mm(即尾状核位置)，缓慢注入血液，注完后留针10min再缓慢退出针头,用无菌骨蜡封闭钻孔，缝合切口。假手术组只进针而不注血，术后相应时点处死。1.4大鼠神经功能评分按照Longa的5分法进行神经功能行为学评分[3]。0分:无神经缺损症状;1分:左前肢不能完全伸直;2分:向左旋转;3分:向左侧倾倒;4分:不能行走或昏迷。分数越高，神经功能障碍

7、越严重。1.5脑组织形态学观察各组大鼠，常规左心室灌注固定、取材（从注射点前后附近1.0mm切开），常规石蜡包埋，行4μm切片，HE染色后光镜下观察组织学变化。每组随机选5片进行细胞计数。ICH组选取血肿周围区，其它组也选择相应脑区，每片计10mm2单位高倍视野坏死神经元数[4]。1.6统计学处理所测数值均用±s表示，P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有极显著性。各组之间比较采用方差分析及t检验，变量间相互关