实验性脑出血大鼠脑内hsp 70 与bcl

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1、实验性脑出血大鼠脑内HSP70与Bcl.freelorrhage（ICH）.MethodsRatslydividedintoaNScontrolgroupandamodelgroup（n=36each）.ICHmodelepoints（6h，12h，24h，48h，72hand1orrhage）theexpressionsofHSP70andBcl-2inedbyimmunohistochemistry.ResultsItorrhage.Thechanges，mainlyinthecortexandhippocamp

2、us，arerelatedtothedegreeofinjury，thetimeelapsedandthelocationoftheaffectedregion.Keyorrhage;immunohistochemistry;rat近年来研究表明，细胞凋亡是出血性脑损伤的重要机制之一，Bcl-2是一种凋亡抑制基因，在细胞凋亡调节中起到重要作用;而HSP70是一种应激保护蛋白，可抑制应激激活蛋白激酶，并发挥其分子伴侣作用，在线粒体上的HSP70可能通过对变性的细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2加以修复或防止其被降解，恢复其凋亡

3、抑制功能［1］。本实验拟在探讨此两种蛋白在急性脑出血大鼠脑内的表达变化规律及二者之间的可能关系。1材料和方法1.1材料1.1.1动物健康成年雄性SD（Sprague-Dam，矢状缝向右3.0mm，深6.3mm为注射点。大鼠经10%水合氯醛（350mg.kg）腹腔麻醉俯卧位固定于立体定位仪上，头皮正中消毒后矢状位切开约1.5cm，暴露前囟点，据图谱调整立体定位仪于注射点（A0.2mm，L3.0mm，V6.3mm），钻颅打孔（直径约1mm）将鼠尾置于40℃水温浴10min后取出擦干消毒，距离鼠尾末端3cm处剪断，用微量进

4、样器吸取新鲜血液约50μl，迅速插入已钻好孔内，进针6.3mm（相当于尾状核位置），注射时间不少于15min，留针10min后缓慢退针，钻孔用骨蜡封闭，局部碘伏消毒后，缝合切口皮肤。大鼠清醒后无偏瘫体征（Longa评分）或血液沿针道反流者弃用。1.2.3免疫组织化学造模成功后大鼠分别于各时相点经10%水合氯醛深度麻醉后，经升主动脉快速灌注37℃生理盐水100ml，然后以250ml固定液（4℃0.01MPBpH7.44%多聚甲醛）灌注固定脑组织，30min内灌完，取全脑，去除小脑和脑干，置于上述固定液中后固定24h，继

5、入20%、30%蔗糖液（4℃pH7.4），直至组织块沉底。将固定脑组织放在恒冷切片机上切取30μm厚的连续冠状切片，于针道前1mm处向背侧随机隔6片取一组邻片。HSP70、Bcl-2均采用漂染法，所有操作均按北京中山公司即用型二步法检测试剂盒说明书进行，脑组织切片用2%H2O2去离子水消除内源性过氧化物酶，依次加入一抗（HSP701∶150、Bcl-21∶100），二抗试剂盒，各步间以0.01mol.LPBS缓冲液振洗，DAB充分显色5min，常规脱色、透明、封片。以PBS代替一抗做阴性对照。所有结果在10，20，4

6、0倍目镜下观察，采用40倍目镜计数每张脑片4个视野，1只大鼠测2张脑片，获得8个数值，取其均数为1只大鼠的最终结果。1.3统计学处理采用SPSS12.0统计软件包进行数据分析，各组数据以ˉx±s表示，两两比较用t检验。2结果2.1血肿形态观察肉眼见出血位于右侧基底节区，出血灶直径约3～4mm，说明造模成功，术后24h见术侧脑弥漫性肿胀，术后第3天血肿有所吸收，术后第7天明显吸收（图1）。图1大鼠脑出血后血肿形态观察（略）2.2阳性细胞表达特点2.2.1形态学观察各组大鼠脑组织HSP70与Bcl-2阳性细胞染色均以胞质

7、有棕黄色物质沉积为主，并可显示细胞轮廓。见图2。图2出血侧大鼠脑组织皮质48h阳性细胞表达（×400）（略）A.HSP70阳性细胞B.Bcl-2阳性细胞2.2.2表达时相与部位对照组HSP70偶有表达，模型组以造模后6h出现阳性细胞表达，术后24h有较明显的表达，术后72h最为显著;而Bcl-2在造模后12h出现阳性细胞，48h达高峰。HSP70在脑内广泛表达，主要见于海马、纹状体和皮质中;Bcl-2阳性神经元集中于出血侧皮质、海马CA1、CA2区及基底节区;二者在血肿区几乎未见阳性细胞表达。2.2.3阳性细胞表达的

8、量见表1，2。表1各组各时相点血肿周围皮质HSP70阳性细胞数（略）生理盐水组各时相点均见少量阳性细胞表达，组内比较:P0.05;与同时相点生理盐水组比较:P0.05表2各组各时相点出血侧皮质Bcl-2阳性细胞数（略）生理盐水组各时相点均见少量阳性细胞表达，组内比较:P0.05;脑出血组与同时相点生理盐水组比较:P0.053讨论了解脑内出血后脑