匹那地尔对大鼠心肌细胞内钙及舒缩功能的影响

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1、匹那地尔对大鼠心肌细胞内钙及舒缩功能的影响：林茹,张泽伟,曹春梅,舒强,夏强【摘要】目的探讨匹那地尔对高钾停搏液处理后大鼠离体心肌细胞内游离钙与舒缩功能的影响。方法SD大鼠心室肌细胞酶解分离静息1～2h后随机分为对照组，高钾停搏液组，匹那地尔强化组，格列苯脲拮抗组。四组细胞均在24℃下保存2h,此后对细胞进行复氧、复灌20min并测定细胞收缩、［Ca2+］i瞬态、肌浆网内贮钙释放功能。结果匹那地尔使心肌细胞在缺血再灌注中收缩功能，［Ca2+］i瞬态，肌浆网内贮钙释放能力明显优于高钾停搏液组（P＜0.01〉及细胞内钙释放后的钙峰回

2、落时间明显短于高钾停搏液组（P＜0.01〉。结论匹那地尔通过维持良好的肌浆网和细胞膜Na+/Ca2+交换体功能来调节钙瞬态变化，减少细胞内钙超载从而改善心肌细胞缺血后收缩功能，同时避免了高钾停搏液的负面效应。【关键词】心脏停搏液；心肌细胞；大鼠　　PinacidilImprovesContractileFunctionandIntracellularCa2+inIsolatedRatCardiacMyocytes　　Abstract:OBJECTIVEETHODSRatmyocytesmol/L),thentheyetempera

3、ture.Parametersofcontractionandintracellularcalcium［Ca2+］itransientseasuredbyvideotrackingandspectrofluorometry.RESULTSDuring20minutesofperfusionafter2hoursincardioplegicsolutionsofbothamplitudeofcontraction(98.30%±9.90%vs81.00%±11.25%,P<0.05)andpeakvelocityofcells

4、hortening(100.90%±13.79%vs76.89%±18.14%,P<0.01)yocytesincardioplegicsolutionplitudesofthe［Ca2+］itransientsevokedbyelectricalstimulationandcaffeine(10mmol/L)increasedby23.31%～40.72%and61.73%,respectively,overthoseincardioplegicsolutioneofthecaffeine-induced［Ca2+］itr

5、ansientdecreasedby（36.64±15.10）%relativetothatmeasuredincardioplegicsolutionentingthecardioplegicsolutioninishedinthepresenceofglibenclamide(10mmol/L).CONCLUSIONAdditionoftheATP-sensitivepotassiumchannelopenerpinacidiltoahighpotassiumcardioplegicsolutionimprovesrecove

6、ryofcontractilefunctionandcytosolicCa2+inisolatedratcardiacmyocytes.　　Keyide批号58H0570)，Fura-2/Am(批号108964-32-5),均购自美国Sigma公司。　　无钙Tyrode氏液配制（mmol/L）：NaCl100、KCl10、KH2PO41.2、MgSO4·7H2O5、葡萄糖20、牛磺酸20，3-(N-吗啉代)丙磺酸10。冲100%O2用KOH(5mol/L)调至pH7.20。K-H液（mmol/L）：NaCl118.5、NaHCO3

7、25、KCl4.75、MgSO41.2,KH2PO41.2、CaCl22.5、葡萄糖11.1。　　1.2左心室单细胞制备成年SD大鼠20只，由浙江大学医学院动物实验室提供。雌雄不拘，体重232g～252g，断头处死后，迅速开胸取出心脏，置于4℃氧饱和Tyrode氏液中洗净血液后固定于Langendorff灌流装置上用95％O2＋5％CO2饱和的K-H液恒温（37℃）恒流行主动脉逆行灌注，流速10ml/min。酶解法分离心室肌细胞［5］。先以无钙Tyrode氏液灌流5min，再以含I型胶原酶0.3g/L的低钙（50μmol/L）Ty

8、rode氏液灌流5min。取下心脏，去掉心房和基底部组织，将左心室肌剪碎，用吸管缓慢吹打，于含1%牛血清白蛋白的低钙Tyrode氏液中37℃孵育15min,再将细胞悬液用直径200mm单层尼龙网过滤，滤液在无钙Tyrode氏液中分三步复钙至Ca2+