南宁市儿童apob基因xba i位点多态性分析

《南宁市儿童apob基因xba i位点多态性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、南宁市儿童ApoB基因XbaI位点多态性分析：胡鹏　经承学　覃远汉　陈萍　李铭芳　裴娟【摘要】目的研究南宁市126名健康体检儿童载脂蛋白B(ApoB)基因XbaI位点各基因型的分布情况，探讨其多态性对儿童生长发育、营养状况、血脂代谢及肾功能的影响。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）技术检测126例健康体检儿童ApoB基因XbaI位点的基因型，计算体质指数（BMI），测定血清总蛋白（TP）、白蛋白（AIB）、球蛋白（GLO）、白蛋白/球蛋白（A/G）、脂蛋白a（LPa）

2、、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、非高密度脂蛋白胆固醇（nonHDL）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、载脂蛋白A1、(ApoA1)、ApoB、ApoA1/B、尿素氮（BUN）、肌酐（Ccr）及尿酸（UA）。结果(1)XbaI位点各基因型的频率分别为X-/X-：9206%（116/126），X+/X-：7.14%（9/126），X+/X+：0.79%（1/126）；等位基因X-与X+的频率分别为9563%和437%；（2）等位基因X+组血清TP、A

3、IB、A/G和ApoA1/B显著低于X-组，而BMI、LPa、TC、TG、nonHDL、LDLC、ApoB、BUN和Ccr明显高于X-组。结论ApoB基因XbaI位点多态性对儿童生长发育、营养状况、血脂代谢及肾功能有影响。【关键词】载脂蛋白B；基因多态性；体质指数；总胆固醇；儿童　　儿童时期的血脂代谢不仅与生长发育、营养状况及肾功能密切相关，也是成年后心血管疾病（cardiovasculardisease，CVD）的重要预示因子〔1〕。Everaldo等〔２〕认为，儿童暴露于各种有害环境因素

4、的机会较成人少，所以环境因素对儿童血脂水平的影响较小，因此，是研究遗传因素对脂质代谢影响的最好群体。本研究选取在血脂代谢与转运途径中具有重要调节作用的基因载脂蛋白B（apolipoproteinB，ApoB）基因XbaI位点〔3〕，探讨其多态性对儿童生长发育、营养状况、血脂代谢及肾功能的影响。　　1对象与方法　　11对象　　2006年6月随机抽取126名南宁市健康体检儿童，其中男72名、女54名，年龄4～12岁，平均（72±32）岁,所有样本均取自稳态群体,符合HardyJ公司）；Xb

5、aI内切酶（大连TaKaRa宝生物工程有限公司），血清指标检测试剂（上海执诚生物技术有限公司），LX20全自动生化分析仪（美国BeckmanCoulter公司）；GelDoc2000凝胶成像分析系统（美国BioRad公司）。　　13基因组DNA提取　　参考文献〔5〕。　　14PCR反应　　50?μl反应体系中，10×缓冲液5?μl,dNTP(25?mmol/LTakara)4?μl,上、下游引物各1?μl,模板DNA10?μl,双蒸水29?μl,二甲基亚砜1?μl。96℃预变性5?mi

6、n后立即置于冰上,加入TaqDNA聚合酶(Takara)025?μl,94℃变性1?min,574℃退火1?min,72℃延伸1?min,循环40次,最后经72℃延伸10?min。取PCR产物5?μl在2%琼脂糖凝胶中电泳,紫外灯下可见在710?bp位置出现一条明亮的条带。　　15酶切反应　　20?μl反应体系中含10?μlPCR产物，2?μl牛血清白蛋白，2?μl10×限制酶消化缓冲液，1?μlXbaI内切酶（10?U/μlTakara），灭菌注射用水5?μl。混匀后置衡温水浴箱中37℃

7、酶切6?h。2%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果。　　16体格检查　　清晨空腹测量身高和体重，计算体质指数。　　17血清指标检测　　空腹12?h以上清晨采静脉血，取血前最后一餐忌高脂饮食，总蛋白（TP）用双缩脲法测定；白蛋白（AIB）和球蛋白（GLO）用溴甲酚绿法测定；总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和脂蛋白a（LPa）用酶法测定；高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）用选择沉淀法测定；非高密度脂蛋白胆固醇（nonHDL）=TC减去HDLC；低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）用液体双试剂法检测

8、，ApoA1和ApoB以免疫比浊法测定；血浆尿素氮（BUN）、肌酐清除率（Ccr）和尿酸（UA）采用全自动生化分析仪检测。　　18统计分析　　选用SPSS115统计软件进行分析，基因型频率和等位基因频率计算采用直接计数法，不同等位基因之间的指标比较采用独立样本T检验。　　2结果　　21XbaI位点各基因型的判定　　PCR产物经过酶切后2%琼脂糖凝胶中电泳可得到3种结果。X+/X+在433bp和277bp处出现2条带，X+/X-在710，433和277bp处出现3条带，X-/X-仅在710b