资源描述:
《南宁市儿童apob基因xbai位点多态性分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、南宁市儿童ApoB基因XbaI位点多态性分析作者:胡鹏经承学覃远汉陈萍李铭芳裴娟【摘要】目的研究南宁市126名健康体检儿童载脂蛋白B(ApoB)基因XbaI位点各基因型的分布情况,探讨其多态性对儿童生长发育、营养状况、血脂代谢及肾功能的影响。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术检测126例健康体检儿童ApoB基因XbaI位点的基因型,计算体质指数(BM),测定血清总蛋白(TP〉白蛋白(AIB>球蛋白(GLO>白蛋白/球蛋白(A/G〉脂蛋白a(LPa总胆固醇(TC>甘油三酯(
2、TG>高密度脂蛋白胆C>非高密度脂蛋白胆醇(non白胆固醇(LDLC>载脂蛋白A1、(ApoA1)sApo氏ApoAI/B.尿素氮(BUN肌肝(Ccr)及尿酸(IAX结果(1)XbaI位点各基因型的频率分别为X-/X-:9206%116/126),X+/X・:7・14吸9/126),X+/X+:0.79%(1/126);等位基因X-与X+的频率分别为9563^0437%;(2)等位基因X+组血清TP、AIRA/G和ApoA1/B显著低于X•组,而BM、LPa、TC;TGnonFOL、LDLC;Apo
3、B.BUN和Ccr明显高于X■组。结论ApoB基因XbaI位点多态性对儿童生长发育、营养状况、血脂代谢及肾功能有影响。【关键词】载脂蛋白B;基因多态性;体质指数;总胆固醇;儿儿童时期的血脂代谢不仅与生长发育、营养状况及肾功能密切相关,也是成年后心血管疾病(cardiovasculardisease,CVD)的重要预示因子〔1〕。Everaldo等〔2〕认为,儿童暴露于各种有害环境因素的机会较成人少,所以环境因素对儿童血脂水平的影响较小,因此,是研究遗传因素对脂质代谢影响的最好群体。本研究选取在血脂代谢
4、与转运途径中具有重要调节作用的基因载脂蛋白B(apoIipoproteinB,ApoB)基因XbaI位点〔3〕,探讨其多态性对儿童生长发育、营养状况、血脂代谢及肾功能的影响。1对象与方法11对象2006年6月随机抽取126名南宁市健康体检儿童,其中男72名、女54名,年龄4〜12岁,平均(72±32)岁,所有样本均取自稳态群体,符合FtardyWinberg遗传平衡定窜P8gt;005X12试剂与仪器引物设计参照Scartezini等⑷报道,序列为:上游引物宁G^GKCTATTCAGAAGCTAA3z
5、,下游引物59-GVGGCCIGVGCTGCT-3Z(大连TaKaRa宝生物工程有限公司);PCR扩增试剂盒(上海生物工程服务有限公司);PTC220基因扩增仪(美国M公司);XbaI内切酶(大连TaKaRa宝生物工程有限公司),血清指标检测试剂(上海执诚生物技术有限公司),LX20全自动生化分析仪(美国BeckrranCoulter公司);GelDdc2000凝胶成像分析系统(美国BioRad公司I13基因组DhA提取参考文献〔5〕。14PCR反应50?pI反应体系中,10x缓冲液5?pI
6、,dNTP(25?rw©l/LTakara)4?pI,上、下游引物各1?pI,模板DhA10?pI,双蒸水29?JI,二甲基亚5M1?JIo96°C预变性5?Mn后立即置于冰上加入TaqDT4聚合酶(Takara)025?p1,94°C变性1?nhnz574°C退火1?niin,72°C延伸1?nhnz循环40次,最后经72°C延伸10?nii①取PCR产物5?pI在2%京脂糖凝胶中电泳,紫外灯下可见在710?bp位置出现一条明亮的条带。15酶切反应20?pI反应体系中含10?pIPCR产物,2?pI
7、牛血清白蛋白,2?pI10x限制酶消化缓冲液,1?pIXbaI内切酶(10?LFJITakara),灭菌注射用水5?pI。混匀后置衡温水浴箱中37弋酶切6?k2%京脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果。16体格检查清晨空腹测量身高和体重,计算体质指数。17血清指标检测空腹12?h以上清晨采静脉血,取血前最后一餐忌高脂饮食,总蛋白(TP)用双缩腺法测定;白蛋白(AIB)和球蛋白(GLO)用漠甲酚绿法测定;总胆固醇(TC甘油三酯(TG)和脂蛋白a(LPa)用酶法测定;高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)用选择沉淀法
8、测定;非高密度脂蛋白胆固醇(nonFDL)二TC减去FDLC;低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)用液体双试剂法检测,ApoA1和ApoB以免疫比浊法测定;血浆尿素氮(BUN〉肌酹清除率(Ccr)和尿酸(LA)采用全自动生化分析仪检测。18统计分析选用SPSS115统计软件进行分析,基因型频率和等位基因频率计算采用直接计数法,不同等位基因之间的指标比较采用独立样本T检验。2纟吉果21XbaI位点各基因型的判定PCR产物经过酶切后2%京脂糖凝胶中电泳可得到3种结