培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影

《培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影【摘要】　　目的研究MS培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，筛选有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的培养基配方。方法采用正交和单因素实验设计，以生长40d的彭泽贝母愈伤组织的生长率和生物碱含量为指标，评价各因素对其影响的大小。结果各因素对彭泽贝母愈伤组织生长影响大小依次为P>Ca>K>N,对生物碱积累影响大小依次为K>N>Ca>P；培养基中NO3-N含量较高时，有利于生物碱的积累；微量元素缺乏时均有利于彭泽贝母愈伤组织的生长，缺Cu、缺I时不利于生物碱的积累。结论有

2、利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的最佳组合分别为：N3P1K3Ca2、N1P2K3Ca1；培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量存在一定影响。【关键词】彭泽贝母愈伤组织生长量生物碱　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectoflargeelements,traceelementsofMSculturemediumonthegroonanthaMigocallus,andtoselecttheculturemediumulation.MethodsSculturemediumhaveeffectsonthegroonanthaMi

3、gocallus.　　KeyonanthaMigo;Callus;Alkaloids;GroonanthaMigo主产于江西北部的彭泽、湖口、都昌、九江、瑞昌、修水等县，已被确定为国产贝母属植物在江西的新分布,彭泽贝母作川贝母使用已有多年的历史，现代药理学研究表明，彭泽贝母的药理、药效接近甚至优于几种常用贝母。近年来，其需求量增大，人们过度采挖，导致其野生蕴藏量锐减，加上人工栽培条件严格，有性繁殖年限长，无性繁殖系数低，病虫害防治难等，不能满足人们长期用药的需求。随着近年来对植物生物化学研究的深入，利用植物细胞、组织或器官培养获得并优化药用植物次生代谢产物，以及最终利用遗传工程制取次

4、生代谢产物以满足人类对药用植物的巨大需求，已成为当前药用植物生物技术领域的研究热点。大规模药用植物组织培养技术的成功，使药用植物组织细胞培养技术在中药领域得到了更深的研究和应用。本课题组研究了不同激素组合对彭泽贝母愈伤组织诱导的影响，并对其高产细胞做了筛选［1，2］。本文在此基础上研究了MS培养基中无机成分对其生长及生物碱含量的影响，为进一步工业化生产奠定基础。　　1材料与仪器　　1.1材料为本实验室继代培养的疏松的彭泽贝母愈伤组织。　　1.2药品贝母素甲购自中国药品生物制品检定所，批号：110750-200607；氯仿、甲醇、氨水、溴甲酚绿、邻苯二甲酸氢钾等均为分析纯。　　1.3仪

5、器UV7501紫外/可见分光光度计（无锡科达仪器厂）；SS为基本培养基，NAA2.5mg/L+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L为激素组合置于温度（20±1）℃，光照强度为1000-1500lx，湿度为100%光照培养箱内培养。　　2.2生长量测定接种和取材前后均称量培养基的重量,计算接种量、收获量和增长率（每个处理3瓶）：接种量=接种后瓶重(g)-接种前瓶重(g)，收获量=收获前瓶重(g)-收获后瓶重(g)，生长率（%）=收获量(g)×100／接种量(g)。　　2.3对其生长及生物碱含量的影响以N，P，K，Ca为4个因素，MS培养基中原浓度、1/2浓度、1/4浓度3个水平，

6、采用正交设计L9(34)进行实验（见表1），培养40d后取出材料，测定生长率和生物碱含量。表1N，P，K，Ca含量正交设计因素水平表（略）　　2.4NH4+-N与NO3-N对愈伤组织生长及生物碱含量的影响培养基中的氮源改用KNO3和NH4Cl，总N浓度不变，研究其不同比例对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，处理见表2。表2铵态N与硝态N对其生长及生物碱含量的影响（略）　　2.5微量元素缺乏对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响以MS培养基为对照，把彭泽贝母愈伤组织接种到分别不加Fe，Mn，B，Mo，Zn，I，Co，Cu的培养基上，培养40d后，取出材料测定生长率和生物碱含量。

7、　　2.6生物碱的提取与含量测定生物碱的提取与含量测定参考刘红宁［3］、上官一平［4］等的方法，并在此基础上做了改进。　　2.6.1试剂的配制pH5.0邻苯二甲酸氢钾缓冲液：称取4g邻苯二甲酸氢钾，加热溶解并定容至100ml，用0.2mol/LNaOH溶液调至pH5.0。0.04%溴甲酚绿溶液配制：精密称取溴甲酚绿80mg，加入少量1mol/LNaOH溶液溶解，定容至200ml,置阴暗处备用。　　2.6.2标准溶液的配制精密称取浙贝甲素0.0063g置于2