培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响论文

《培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响论文【摘要】目的研究MS培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，筛选有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的培养基配方。方法采用正交和单因素实验设计，以生长40d的彭泽贝母愈伤组织的生长率和生物碱含量为指标，评价各因素对其影响的大小。结果各因素对彭泽贝母愈伤组织生长影响大小依次为PCaKN,对生物碱积累影响大小依次为KNCaP；培养基中NO3-N含量较高时，有利于生物碱的积累；微量元素缺乏时均有利于彭泽贝母愈伤组织的生长，缺Cu、缺I时

2、不利于生物碱的积累。结论有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的最佳组合分别为：N3P1K3Ca2、N1P2K3Ca1；培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量存在一定影响。【关键词】彭泽贝母愈伤组织生长量生物碱Abstract：ObjectiveTostudytheeffectoflargeelements,traceelementsofMSculturemediumonthegroonanthaMigocallus,andtoselecttheculturemediumulation.Me

3、thodsSculturemediumhaveeffectsonthegroonanthaMigocallus.KeyonanthaMigo;Callus;Alkaloids;GroonanthaMigo主产于江西北部的彭泽、湖口、都昌、九江、瑞昌、修水等县，已被确定为国产贝母属植物在江西的新分布,彭泽贝母作川贝母使用已有多年的历史.freelg/L+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L为激素组合置于温度（20±1）℃，光照强度为1000-1500lx，湿度为100%光照培养箱内培养。2.2生长量测定接种和

4、取材前后均称量培养基的重量,计算接种量、收获量和增长率（每个处理3瓶）：接种量=接种后瓶重(g)-接种前瓶重(g)，收获量=收获前瓶重(g)-收获后瓶重(g)，生长率（%）=收获量(g)×100／接种量(g)。2.3对其生长及生物碱含量的影响以N，P，K，Ca为4个因素，MS培养基中原浓度、1/2浓度、1/4浓度3个水平，采用正交设计L9(34)进行实验（见表1），培养40d后取出材料，测定生长率和生物碱含量。表1N，P，K，Ca含量正交设计因素水平表（略）2.4NH4+-N与NO3-N对愈伤组织生长及生物碱含量

5、的影响培养基中的氮源改用KNO3和NH4Cl，总N浓度不变，研究其不同比例对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，处理见表2。表2铵态N与硝态N对其生长及生物碱含量的影响（略）2.5微量元素缺乏对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响以MS培养基为对照，把彭泽贝母愈伤组织接种到分别不加Fe，Mn，B，Mo，Zn，I，Co，Cu的培养基上，培养40d后，取出材料测定生长率和生物碱含量。2.6生物碱的提取与含量测定生物碱的提取与含量测定参考刘红宁［3］、上官一平［4］等的方法，并在此基础上做了改进。2.6.1试剂的

6、配制pH5.0邻苯二甲酸氢钾缓冲液：称取4g邻苯二甲酸氢钾，加热溶解并定容至100ml，用0.2mol/LNaOH溶液调至pH5.0。0.04%溴甲酚绿溶液配制：精密称取溴甲酚绿80mg，加入少量1mol/LNaOH溶液溶解，定容至200ml,置阴暗处备用。2.6.2标准溶液的配制精密称取浙贝甲素0.0063g置于25ml容量瓶中，加氯仿溶解，定容，得浙贝甲素标准溶液。2.6.3标准曲线的制备精密吸取浙贝甲素标准液1，3，5，7，9ml，用氯仿定容至10ml,分别置分液漏斗中，加水10ml，溴甲酚绿溶液2ml和邻

7、苯二甲酸氢钾缓冲液2ml，再精密加入三氯甲烷20ml，密塞，摇匀，静置30min，分取氯仿层。另取氯仿10ml，同法操作，所得氯仿层为空白，在411nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=12.071X+0.1005,R2=0.9988。见图1。2.6.4最大吸收波长选择取1ml标准溶液萃取的氯仿层，照紫外-可见分光光度法在200～800nm波长范围内进行扫描，此对照品在411nm波长处有最大吸收峰，故选择411nm为测定波长。2.6.5样品处理取彭泽贝母愈伤组织于60℃

8、干燥至恒重，粉碎，过4号筛，精密称取贝母粉末0.5g，用10%氨水2ml湿润30min，加混合溶剂（氯仿∶甲醇=4∶1）20ml超声提取40min，过滤，滤液于60°C水浴蒸干，再用氯仿溶解，置分液漏斗中，加水10ml，溴甲酚绿溶液2ml和邻苯二甲酸氢钾缓冲液2ml，再精密加入三氯甲烷（总30ml），密塞，摇匀，静置30min，分取氯仿层，并定容至50ml,另取氯仿30m