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时间:2018-11-17
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1、培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响论文【摘要】目的研究MS培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响,筛选有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的培养基配方。方法采用正交和单因素实验设计,以生长40d的彭泽贝母愈伤组织的生长率和生物碱含量为指标,评价各因素对其影响的大小。结果各因素对彭泽贝母愈伤组织生长影响大小依次为PCaKN,对生物碱积累影响大小依次为KNCaP;培养基中NO3-N含量较高时,有利于生物碱的积累;微量元素缺乏时均有利于彭泽贝母愈伤组织的生长,缺Cu、缺I时
2、不利于生物碱的积累。结论有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的最佳组合分别为:N3P1K3Ca2、N1P2K3Ca1;培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量存在一定影响。【关键词】彭泽贝母愈伤组织生长量生物碱Abstract:ObjectiveTostudytheeffectoflargeelements,traceelementsofMSculturemediumonthegroonanthaMigocallus,andtoselecttheculturemediumulation.Me
3、thodsSculturemediumhaveeffectsonthegroonanthaMigocallus.KeyonanthaMigo;Callus;Alkaloids;GroonanthaMigo主产于江西北部的彭泽、湖口、都昌、九江、瑞昌、修水等县,已被确定为国产贝母属植物在江西的新分布,彭泽贝母作川贝母使用已有多年的历史.freelg/L+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L为激素组合置于温度(20±1)℃,光照强度为1000-1500lx,湿度为100%光照培养箱内培养。2.2生长量测定接种和
4、取材前后均称量培养基的重量,计算接种量、收获量和增长率(每个处理3瓶):接种量=接种后瓶重(g)-接种前瓶重(g),收获量=收获前瓶重(g)-收获后瓶重(g),生长率(%)=收获量(g)×100/接种量(g)。2.3对其生长及生物碱含量的影响以N,P,K,Ca为4个因素,MS培养基中原浓度、1/2浓度、1/4浓度3个水平,采用正交设计L9(34)进行实验(见表1),培养40d后取出材料,测定生长率和生物碱含量。表1N,P,K,Ca含量正交设计因素水平表(略)2.4NH4+-N与NO3-N对愈伤组织生长及生物碱含量
5、的影响培养基中的氮源改用KNO3和NH4Cl,总N浓度不变,研究其不同比例对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响,处理见表2。表2铵态N与硝态N对其生长及生物碱含量的影响(略)2.5微量元素缺乏对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响以MS培养基为对照,把彭泽贝母愈伤组织接种到分别不加Fe,Mn,B,Mo,Zn,I,Co,Cu的培养基上,培养40d后,取出材料测定生长率和生物碱含量。2.6生物碱的提取与含量测定生物碱的提取与含量测定参考刘红宁[3]、上官一平[4]等的方法,并在此基础上做了改进。2.6.1试剂的
6、配制pH5.0邻苯二甲酸氢钾缓冲液:称取4g邻苯二甲酸氢钾,加热溶解并定容至100ml,用0.2mol/LNaOH溶液调至pH5.0。0.04%溴甲酚绿溶液配制:精密称取溴甲酚绿80mg,加入少量1mol/LNaOH溶液溶解,定容至200ml,置阴暗处备用。2.6.2标准溶液的配制精密称取浙贝甲素0.0063g置于25ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容,得浙贝甲素标准溶液。2.6.3标准曲线的制备精密吸取浙贝甲素标准液1,3,5,7,9ml,用氯仿定容至10ml,分别置分液漏斗中,加水10ml,溴甲酚绿溶液2ml和邻
7、苯二甲酸氢钾缓冲液2ml,再精密加入三氯甲烷20ml,密塞,摇匀,静置30min,分取氯仿层。另取氯仿10ml,同法操作,所得氯仿层为空白,在411nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程Y=12.071X+0.1005,R2=0.9988。见图1。2.6.4最大吸收波长选择取1ml标准溶液萃取的氯仿层,照紫外-可见分光光度法在200~800nm波长范围内进行扫描,此对照品在411nm波长处有最大吸收峰,故选择411nm为测定波长。2.6.5样品处理取彭泽贝母愈伤组织于60℃
8、干燥至恒重,粉碎,过4号筛,精密称取贝母粉末0.5g,用10%氨水2ml湿润30min,加混合溶剂(氯仿∶甲醇=4∶1)20ml超声提取40min,过滤,滤液于60°C水浴蒸干,再用氯仿溶解,置分液漏斗中,加水10ml,溴甲酚绿溶液2ml和邻苯二甲酸氢钾缓冲液2ml,再精密加入三氯甲烷(总30ml),密塞,摇匀,静置30min,分取氯仿层,并定容至50ml,另取氯仿30m
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