匹维溴胺对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠组织sp含量的影响

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1、匹维溴胺对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠组织SP含量的影响：李丹，张锋雷，李任锋，王艳杰，王德山【摘要】目的观测匹维溴胺对腹泻型肠易激综合征(diarrhea-prodominantirritableboe,D-IBS)模型大鼠结肠组织P物质(SP)含量及表达变化影响，探讨匹维溴胺治疗D-IBS机制。方法采用应激与束缚相结合的方法复制D-IBS动物模型后，应用ELISA、免疫组化方法检测结肠组织SP含量及表达。结果与正常组比较，模型组大鼠结肠组织SP含量及其表达明显增高;与模型组比较,匹维溴胺组大鼠结肠组织SP含量及其表达明显降低。结论匹维溴胺治疗D-IBS模型大鼠的疗效与

2、SP含量及其表达下调有关。【关键词】肠易激综合征;腹泻型;匹维溴胺;P物质EffectsofPinaveriumBromideonSPContentofColonTissueinRatsinantIrritableBoeLIDan,ZHANGFenglei,LIRenfeng,edicinecollegeofBasicMedicine,Shenyang110032China)Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofthePinaveriumbromideonsubstanceP(SP)contentofcolontissueinra

3、tsinantirritableboe(D-IBS)inordertoexploremechanismofactionthePinaveriumbromideonD-IBS.MethodsD-IBSanimalmodelmunohistochemistryandELISAmethodincolontissue.ResultsModelratsparedalgroupSPbromidegroupparedodelgroup,SPbromideactstotreatD-IBSmaybeconnectede;diarrhea-predominant;pinaveriumbro

4、mide;substanceP　　IBS是一种严重影响人类生活质量的功能性疾病，其病因及发病机制至今尚未完全阐明，近年来脑肠互动的发病模式和神经内分泌网络的发病机制正成为研究的热点。SP作为重要的脑肠肽之一，在胃肠道的分泌和运动中起极其重要的作用。本研究通过观测肠道钙离子拮抗剂匹维溴胺对D-IBS模型大鼠结肠组织SP含量及表达的影响，探讨匹维溴胺治疗D-IBS的可能机制。　　1材料和方法　　1.1动物与分组　　SPF级雄性2235型手动石蜡切片机，EG1150C型包埋机，HI1210摊片机，HI1220型烘片机(德国LEICA)，BX51型反射荧光显微镜(日本OLYMP

5、US);2010型anthos酶标仪、全自动酶标洗板机(奥地利安图斯)。　　1.4造模方法　　按文献方法[1]进行改良，对模型组和匹维溴胺组进行应激与束缚刺激。18d循环接受6种刺激：①冷水游泳(14℃，5min);②夹尾(180s)③禁水(24h);④禁食(24h);⑤电击(电压为30V，电击5s，间歇5s，共进行120s);⑥温箱(40℃，5min)平均每种刺激3次;同时每天用宽透明胶带束缚前肩、前上肢及胸部，限制其搔抓头面部，束缚时间1h，连续18d。　　1.5治疗方法　　各组造模结束后第2d开始进行治疗。匹维溴胺组按照实验动物研究“等效剂量”的计算方法，每天15

6、mg/kg体重灌胃给药;正常组和模型组每天灌服等容量生理盐水，均连续治疗7d。　　1.6模型评价　　包括一般状态观察和体重;排便次数及性状，并于实验第18天、第25天记录1h内粪便点数。病理学观察：各组随机选取2只大鼠，取其结肠下段，常规HE染色，光镜下观察结肠组织病理学改变。　　1.7免疫组化方法　　采集各组结肠组织块，4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切片(5μm)。按SABC免疫组化法进行标记，操作步骤按试剂盒说明进行。DAB室温显色5～30min，镜下控制反应时间，阳性染色呈棕黄色。应用免疫组化分析系统进行灰阶度扫描，以平均光密度(OD)表示，每张切片随机取3个视

7、野进行分析，取其平均值。　　1.8ELISA方法　　采集各组结肠组织块用冷盐水洗净，滤纸吸干，按1∶9加入生理盐水制备组织匀浆，离心取上清。按照ELISA试剂盒操作步骤进行，应用全自动酶标仪，在450nm处测定各孔的OD值，采用CurveExpert1.3进行标准曲线的绘制，并计算对应的浓度值。　　1.9统计学方法　　实验数据用均数±标准差(±s)表示，用SPSS15.0分析，多组间比较用单因素方差分析，P<0.05为有统计学意义。　　2结果　　2.1匹维溴胺对D-IBS模型大鼠一般状态影响　　与正常组比较，D-IBS模型组大鼠出现