流式细胞术测定survivin基因在大肠癌中的表达及其意义

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1、流式细胞术测定Survivin基因在大肠癌中的表达及其意义：王淑强李鹏武欣郝秀轻李秀娟【摘要】目的：研究Survivin基因在大肠癌中的表达及其与肿瘤发生、发展的关系。方法：流式细胞术(Floetry，FCM)检测58例大肠癌(Colorectalcarcinoma,CC)患者及10例正常者黏膜(Normalmucosa,NM)中Survivin表达情况，并结合临床病理相关因素，应用SPSS11.0统计软件进行统计学分析。结果：FCM定量检测表明，正常黏膜组Survivin表达平均FI值为1.00±0.2

2、8，高、中、低分化腺癌及粘液腺癌组Survivin表达FI值分别为3.16±1.39、3.20±1.04、3.32±0.48和3.31±1.06。高、中、低分化腺癌及粘液腺癌组Survivin表达均明显高于正常黏膜组(P<0.05)。大肠癌淋巴结转移组平均FI值3.11±1.19，显著高于无淋巴结转移组2.26±1.38(P<0.05)。FCM结果显示Survivin表达与患者的年龄、性别、肿瘤的发生部位等无关(P>0.05)。结论：Survivin在大肠癌中表达异常增高，显著高于正常肠

3、黏膜组织。Survivin在大肠癌中的表达与淋巴结转移密切相关。【关键词】大肠癌;Survivin基因;流式细胞术　　【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatetheexpressionofsurvivinincoloreatalcarcinomasandrelationshipbetorigenesisanddevelopment.Methods:TheexpressionofSurvinancolorectalcarcinomasand10casesalcolorectalca

4、rcinomabyFCManalysis.TheclinicalpathologicalsignificancesofsurbvivinexpressioninCCoderatelyandpoolydifferentiatedCCcolorectalcarcinomaerarkablecorrelationsorlocationect.(P>0.05).Conclusion:Expressionsofsurvivinatproteinlevelincolorectalcarcinomaalcolo

5、rectalmucosa.Theexpressionsofthethreemathersaphnodemetastasis.　　【KEY)中Survivin的表达情况，探讨其在大肠癌发生、发展和转移中作用，为大肠癌浸润和转移预测、预后判断提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　收集河北北方学院附属第一医院200503—200603月间手术切除的大肠癌标本58例，同时选取大肠远端病理证实为正常黏膜组织10例。58例大肠癌中男性28例，女性30例;年龄30～78岁;发生部位，结肠癌22例，大肠癌3

6、6例;组织分化程度：高分化腺癌26例，中分化腺癌20例，低分化腺癌6例，粘液腺癌6例;有淋巴结转移31例，无淋巴结转移组27例。所有标本蜡块均进行4～5μm连续切片，HE染色病理确诊。将剩余蜡块再进行切片做流式。　　1.2主要试剂兔抗人Survivin多克隆抗体，羊抗兔FITCIgG,DAB显色剂，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。　　1.3试验方法　　1.3.1单细胞悬液的制备　　①把石蜡包埋组织切成40μm厚的组织切片，放入10mL的试管中。　　②加入二甲苯8mL，在室温下脱蜡2d，期间更换二次二

7、甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯。　　③水化，依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5mL，每步10min，加入Dode值)，计算荧光指数(fIuorescenceIndex,FI)，并以荧光指数显示Survivin基因蛋白表达强弱并进行相关的数据分析。　　FI计算公式：FI=(样本基因蛋白表达荧光强度-正常样品的荧光强度)/正常样品的荧光强度。　　1.5统计学方法数据库的建立和数据分析采用SPSS11.0统计软件进行统计分析，Survivin基因表达的流式细胞仪检测结果进行单因素方差分析，P<

8、;0.05有统计学差异。　　3讨论　　Survivin是迄今发现最强的一种凋亡抑制因子，它定位于染色体17q25,是凋亡抑制蛋白(Inhibitorofapoptosisprotein,IAP)家族中最小的成员，人的Survivin蛋白由142个氨基酸组成，为16.5KD，蛋白结构仅单个N端杆状病毒重复序列(baculovirusIAPrepeat，BIR)有长的C端alpha螺旋区和二聚体排列结构，BIR结构被认为对凋亡起