cox2基因在大肠癌的表达及其意义

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1、COX2基因在大肠癌的表达及其意义作者：王淑强李秀娟李鹏武欣王琳冬【摘要】目的探讨COX2基因在大肠癌中表达的意义。方法收集手术切除的大肠癌标本58例，同时选取大肠癌远端正常黏膜组织10例，应用流式细胞术（FCM）检测大肠癌及正常黏膜中COX2表达情况，根据平均荧光强度计算荧光指数（FI）。结果COX2表达平均FI值正常黏膜组为1.00±0.28，高、中、低分化及黏液癌组分别为2.47±1.41、2.70±1.08、3.16±1.34和2.01±1.43，高、中、低分化及黏液癌组COX2表达均明显高于

2、正常黏膜组（P＜0.01）；大肠癌淋巴结转移组平均FI值（2.45±1.41）显著高于无淋巴结转移组（1.61±1.27）（P＜0.05）。COX2的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的发生部位等无关。结论COX2在大肠癌中表达异常增高，并与淋巴结转移密切相关。【关键词】大肠癌；COX2；流式细胞术　　近年来研究表明，环氧合酶(COX)2在多种肿瘤中均呈高表达，在肿瘤发生、发展、分化、转移中起重要作用。在细胞癌变过程中，MPs的表达，促进肿瘤的转移〔1〕。本研究采用流式细胞术检测大肠癌及大肠远端正常黏膜中CO

3、X2的表达情况，探讨COX2在大肠癌发生、发展和转移中的作用，为预测大肠癌浸润和转移提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1一般资料　　收集手术切除的大肠癌标本58例，男28例，女30例，年龄30～78岁（平均58.3岁）。病变部位：结肠癌22例，直肠癌36例；分化程度：高分化腺癌26例，中分化腺癌20例，低分化腺癌6例，黏液腺癌6例；转移情况：有淋巴结转移31例，无淋巴结转移27例。同时选取大肠癌远端正常黏膜组织10例。　　1.2方法　　1.2.1试剂　　兔抗人COX2单克隆抗体（SantaCrusBi

4、otechonlogy，INC），羊抗兔IgGFITC，DAB显示剂，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。　　1.2.2实验步骤　　单细胞悬液的制备：石蜡包埋组织HE染色，切成40μm厚的组织片5片，放入10ml的试管中，加入二甲苯8ml，在室温下脱蜡2d，其间更换2次二甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯；依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5ml，每步10min，加入蒸馏水5ml，10min后弃之。加入2ml0.5%胰蛋白酶（pH1.5）消化液，置37℃恒温水浴中消化30min，在消化期间，每隔10m

5、in用振荡器振荡1次，消化30min后，立即加生理盐水终止消化，经300目尼龙网过滤，未消化好的组织可做第二次消化。收集细胞悬液，以1500r/min离心沉淀5min，再用生理盐水漂洗2次，以800r/min离心沉淀5min，去碎片。细胞的免疫荧光标记：取单细胞悬液1×106/ml，加入兔抗人COX2单克隆抗体工作液0.1ml室温孵育30min，加入PBS10ml洗涤1次，弃上清，加入羊抗兔FITCIgG二抗工作液10ml，避光室温孵育30min，加入PBS10ml，800r/min离心沉淀5min，弃上清

6、除去未结合的荧光二抗，上机检测并加入PBS0.1ml经500目铜网过滤后上机检测。蛋白免疫荧光标记物测定设一抗或二抗的本底对照和阴性对照。检测条件及参数采用美国BeckmanCoulter公司生产的EpicsXLII型流式细胞仪，应用Expo32ADC软件分析数据。测定前以Flo.　　3讨论人的COX2基因定位于第一号染色体1q25.225.3，长约8.3kb，其mRNA约4.5kb，由10个外显子和9个内含子构成；COX2基因的3URT区域包含1.5kb的22个AUUUA基因序列，与mRNA不稳定有关

7、〔2〕。COX2基因编码604个氨基酸，含17个氨基酸残基的信号肽。COX是一种与生物膜相结合的花生四烯酸转化为前列腺素过程中发挥作用的限速酶。COX2基因为诱导型蛋白，被认为是“快速反应基因”，静息时不表达，当细胞受到各种刺激时则迅速合成，表达增加癌症的发生是原癌基因激活和抑癌基因失活为基础的多步骤、多阶段过程，通常其表达产物作用于细胞生长、分化及代谢过程，最终导致癌变。COX2在多种肿瘤如食管癌、肾癌、胰腺癌等组织中均有表达，研究表明，它在肿瘤的增殖、凋亡及转移中发挥重要作用。COX2促进肿瘤的发生

8、和肿瘤的恶性表型转换的可能机制〔3〕：（1）对细胞凋亡的抑制：可通过减弱和抑制NO信号途径来抑制细胞凋亡。（2）促进肿瘤血管的发生：血管内皮细胞通常不会增生，除非受到某些刺激，肿瘤血管的形成是针对不同因子的刺激而发生。VEGF作用于血管内皮细胞，通过增高血管内皮细胞渗透性和促进内皮细胞变形、迁徙等促进肿瘤血管生成〔4〕。研究证实，COX2表达与VEGF的表达呈正相关〔5～7〕。（3）