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1、具有抗肿瘤活性的胡萝卜脂溶性成分研究【关键词】胡萝卜;谷甾醇;抗肿瘤药,植物;色谱法,高压液相;药理活性 [Abstract]Objective:Tosearchforpound(s)lipophilicfractionofDaucuscarota.Methods:ExtractionfromD.carotaicalmeanssuchassolventextraction,thin-layerchromatography,columnchromatography,andhighperformanceliquidchro
2、matogram.Thestructuralidentificationinationofthechemicalandphasicalconstants,1H-NMR,13C-NMRandultravioletspectrum.Results:Threeconstituents,β-sitosterol,laserineandepilaserine,thelipophilicfractionofD.carota.Amongthe3constituents,epilaserineshoiacell,HL-60,andlas
3、erineandepilaserineD.carotaforthefirsttime.Conclusion:D.carotahasanticancerconstituent,epilaserine,initslipophilicfraction. [Keyatography,highpressureliquid;pharmacoactive胡萝卜(DaucuscarotaL.Var.sativaDC)是一种食用植物,其中含有蛋白质、糖类、脂肪、钙、磷、铁、钠、维生素B1、维生素B2、烟酸以及维生素C等有益健康的物质[1
4、]。很多研究表明胡萝卜的脂溶性部位含有的类胡萝卜素(carotenoids),与胡萝卜的营养和促健康作用相关[2]。胡萝卜的脂溶性部位得到的人参炔醇(panaxynol)等天然聚乙炔醇类化合物(polyacetylenes),具有抗癌、抗菌、抗真菌、杀虫、免疫抑制等多种生物活性[3]。为了进一步了解胡萝卜的脂溶性部位的化学成分与其生物活性之间的相互关系,对胡萝卜石油醚提取部位的化学成分进行了研究,以期从中分离出具有生物活性的单体化合物。 1仪器、试剂和原料 1.1仪器 R谱与已知化合物谱图比对可知b为Epilase
5、rine,(2,3-Dimethyl-but-2-enoicacid-1-(7-methoxy-benzo〖1,3〗dioxol-5-yl)-2-(2-methyl-1-methylene-but-2-enyloxy)-propylester)。其1H-NMR谱如图4所示。 图2中c为白色针状晶体(丙酮),易溶于氯仿、乙醚,难溶于水、甲醇。Mp:138℃-139℃(CHCl3),Liebermann-Burchard反应呈阳性,提示为甾体化合物。其波谱数据中1HNMR(CDCl3)δ:5.34(1H,d,J=8.92H
6、z,H-6),3.51(1H,d,J=5.87Hz,H-3);13MR(CDCl3)δ:71.85(d,C-3),121.73(d,C-6),140.79(s,C-5),11.88(q,C-18),19.41(q,C-19)。均与已知化合物β-谷甾醇(β-Sitosterol)特征峰符合,且c在数种展开剂条件下进行薄层层析,其Rf值与β-谷甾醇对照品一致,两者混合熔点不下降。由此可确定c为β-谷甾醇(β-Sitosterol)。 2.3Laserine、Epilaserine的药理活性研究 药物:将分得的Lase
7、rine和Epilaserine用乙醇溶解,备用。分组:Laserine浓度分别为10-4,10-5,10-6,10-7,10-8mol/L5组;Epilaserine浓度分别为10-4,10-5,10-6,10-7,10-8mol/L5组;空白对照组。 PC12细胞接种于经多聚赖氨酸包被过的35mm培养板中,加入10%(V/V)马血清和5%胎牛血清的DMEM培养液,并根据分组不同加入不同浓度的Laserine和Epilaserine,置37℃,5%CO2条件下培养。A549细胞用含10%小牛血清的DMEM高糖培养基在
8、37℃、5%CO2细胞培养箱内进行培养,湿度75%。HL-60细胞在RPMI1640培养基中培养,其中有10%的小牛血清,100U/ml青霉素,和100mg/L链霉素,在5%CO2的37℃孵箱中孵育。 2.3.1Laserine对HL-60的抑制活性见图5。 2.3.2Epilaserine对HL-60的抑制活性