加热对人肝癌耐药细胞模型┐7721-adm细胞内药物浓度的影响

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1、加热对人肝癌耐药细胞模型┐7721/Adm细胞内药物浓度的影响　　摘要:目的探讨比较43℃加热前后人肝癌细胞-7721（以下简称7721细胞）和耐药人肝癌细胞模型-7721/Adm（以下简称7721/Adm细胞）细胞内阿霉素（ADM）药物浓度的变化.方法以体外培养的人肝癌细胞-7721和自行培养建立的人肝癌细胞模型-7721/Adm为研究对象，采用水浴加温法、流式细胞荧光技术观察阿霉素化疗加热前后7721和7721/Adm细胞胞内阿霉素（ADM）浓度的变化.结果加热后7721细胞组提高30.8%，HCC-7721/Adm组提高51%.结论加热可明显提高这两种细

2、胞内的阿霉素浓度，从而提高这两种细胞的化疗敏感性，为临床克服多药耐药问题提供了重要依据.　　Keyia，induced;liverneo-plasms;cellline;drugresistance，multiple　　Abstract:AIMToparativelystudythecytotoxiceffectsofchemotherapyandthermo-chemotherapyofADMonhu-manhepatocellularcarcinomacellline（7721）andhumanmultidrug-resistanthepatocellul

3、arcarcinomacellline（7721/Adm）.METHODSBymeansofiaonintracellularconcentrationofADMof7721andthatof7721/Adme┐try.RESULTS①Sensitivityof7721/AdmtoADMiare-markablyincreasedthesensitivityof7721and7721/AdmtoAMD;③Hyperthermiaincreasedtheintracellularconcentra-tionofADMinthosetentionedabove，e

4、s-peciallyin7721/Adm.CONCLUSIONHyperthermiacanin-creasethesensitivityof7721and7721/AdmtoADM.　　0引言　　热疗在肿瘤治疗上的应用已有较长的历史.研究表明，加热可以显著提高某些肿瘤细胞对化疗药物的敏感性［1-5］，但其机制不很清楚.近年来，肿瘤细胞的多药耐药性影响肿瘤化疗效果问题日益引起临床医生重视，并进行了卓有成效的研究，在药物和生物因子逆转耐药性等方面取得一定进展;目前对加热降低耐药肿瘤细胞的耐药性以及加热对细胞耐药性改变的分子生物学机制方面的了解和研究却不深入，有关

5、研究报道也不多.为此，在自行培养的人肝癌细胞耐药模型-7721/Adm基础上［6］，研究了加热对该细胞内阿霉素浓度的影响，报告如下.　　1材料和方法　　1.1细胞培养7721细胞由本校实验动物中心提供，按常规法培养于PRMI-1640全培养液中（100mL・L-1小牛血清，青霉素10万u・L-1，链霉素100mg・L-1），单层培养于37℃，CO2恒温孵育箱内，用接种传代第3日的细胞做实验;自行建立7721/Adm细胞［6］，按常规法培养于含阿霉素（0.5mg・L-1）的PRMI-1640全培养液中（10

6、0mL/L-1小牛血清，青霉素10万u・L-1，链霉素100mg・L-1），单层培养于37℃，CO2恒温孵育箱内，用接种传代稳定的细胞做实验.　　1.2细胞处理①采用水浴加温法（数字式恒温浴槽，温波±0.1℃），将7721细胞、7721/Adm细胞培养瓶浸没于水中，温度设定为43℃;加热时间设定为30，60min两组，每组4瓶;②阿霉素（ADM）终浓度设1mg・L-1一个浓度，用微量进样器加药，化疗时间统一为60min;③热与ADM的组合采用热化同时（加热同时ADM化疗）一个方式;④细胞分组:阴性对照组、单纯化疗组、加

7、热化疗组共三组，每组4瓶;⑤将实验处理过的细胞消化成细胞悬液（5×105个细胞/mL）;⑥以未处理的细胞为阴性对照，以不含细胞的PRMI-1640全培养液为空白对照.　　1.3MTT药敏实验将实验处理过的细胞消化成细胞悬液（5×105个细胞/mL）接种到96孔板上，每组设三个板、三个复孔，每孔200μL（1×105个细胞/mL），以未经处理的细胞为阴性对照，以不含细胞的1640全培养液为空白对照，常规法培养过夜后，去上清液，加入MTT50μL/孔，继续培养4～6h，去上清液后加入二甲基亚砜（DMSO）100μL/孔，充分震荡5min，上酶联免疫检测仪，测波长4

8、90nm每孔的光密度值（A值），计算细