内毒素对离体鼻黏膜上皮细胞ifnγ、il4表达的影响

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1、内毒素对离体鼻黏膜上皮细胞IFNγ、IL4表达的影响【摘要】目的：探讨内毒素(LPS)对鼻黏膜上皮细胞(HNEC)IFNγ、IL4表达的影响。方法:设LPS组、LPS+地塞米松（DXM）组、LPS+吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组及生理盐水空白对照组。采用酶联免疫吸附及原位杂交方法检测培养上清液中IFNγ、IL4及HNEC内NFкBp50mRNA的表达，凝胶电泳迁移率检测NFкBp50，观察PDTC及DXM对NFкBp50活化抑制后IFNγ和IL4蛋白水平。结果:(1)0～100μg/LLPS随浓度的增加，IFNγ分泌量增多；

2、>100μg/L后，IFNγ分泌量减少；100μg/LLPS刺激HNEC分泌IFNγ的作用最强。0～20μg/LLPS随浓度的增加，IL4分泌量增多；>20μg/L后，IFNγ分泌量减少；20μg/LLPS刺激HNEC分泌IL4的作用最强，40μg/LLPS刺激IFNγ和IL4的分泌有交叉，二者维持于一定的水平。(2)50μg/LLPS刺激HNEC后随时间延长IFNγ分泌量逐渐增加，从4h开始即有明显上升(P<0.05)，8h达到峰值；IL4随时间延长分泌量逐渐增加，从2h开始即有明显上升(P<0.05)，6h

3、达到峰值。(3)PDTC和DXM均抑制NFкBp50的表达和活性，减少HNEC分泌IFNγ和IL4,DXM4.0μg/L时,下降更明显,但高于此浓度时,不引起进一步的降低。结论:LPS对HNEC的刺激反应与浓度呈剂量依赖性，适当浓度的LPS刺激有利于HNEC分泌的Th1/Th2细胞因子维持平衡状态；过高或过低浓度的LPS刺激可诱导HNEC的Th1/Th2细胞因子失衡分泌，这可能是GNB在慢性鼻、鼻窦炎（CRS）的致病机理。【关键词】内毒素类；上皮细胞；鼻黏膜；核因子кBp50;IFNγ；白细胞介素4　　［Abstract］Objective:T

4、ostudytheinfluenceofendoutoxin(lipopolysaccharide,LPS)toexpressionofIFNγandIL4inhumannasalepithelialcell(HNEC).Methods:CulturedHNECethasone,andLPSpluspyrrolinedithiocarbamaterespectively.Ablankcontrolgroup(groupB)alsaline.ExpressionofIFNγandIL4insupernatantsofculturemediaand

5、NFкBp50mRNAexpressioninHNECelinkedimmuneadsorption(ELISA)andhybridizationinsitu;TheactivationofNFкBp50obilityanalysis;TheproteinlevelchangesofIFNγandIL4aftertheinhibitionofPDTCandDXMtoNFкBp50otethesecretionsofIFNγandIL4intermsoftime.TheLPSexcitementcouldsignificantlyprom

6、otetheactivationofNFкBp50,ulationofLPSshoulationofLPSaintainthebalance;ThestimulationofLPSightbethepathopoiesismechanismofgramnegativebacilliinchronicrhinitisandrhinosinusitis.　　［Keyucosa;nuclerfactorкBp50;IFNΥ;interleukin4　　呼吸道上皮层是一个复杂的系统，由多种细胞共同协调各种功能，包括离子转运、黏蛋白产生、纤毛清洁和湿化等，

7、这些功能对于维持呼吸道上皮层微环境至关重要[1]。Eisenbarth等[2]研究认为内毒素（LPS）的暴露水平与呼吸道炎症性疾病的发生和发展有密切的关系，本研究采用组织细胞培养技术在模拟体内环境下最大限度获得结构和功能上接近体细胞的大量鼻黏膜上皮细胞(humannasalepithelialcell,HNEC)，检测HNEC在不同浓度的LPS刺激下释放IFNγ和IL4蛋白水平、NFκBp50mRNA表达和活性，同时观察地塞米松（dexamethasone，DXM）对它们的影响，为慢性鼻炎及鼻窦炎的防治提供一定的实验依据。　　1材料和方法　　1.

8、1材料　　1．1.1HNEC培养　　经鼻内镜行鼻中隔偏曲矫正术中切除的正常下鼻甲黏膜组织30例