内毒素对离体鼻黏膜上皮细胞IFNγ、IL4表达的影响.doc

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1、内毒素对离体鼻黏膜上皮细胞IFNγ、IL4表达的影响【摘要】目的：探讨内毒素(LPS)对鼻黏膜上皮细胞(HNEC)IFNγ、IL4表达的影响。方法:设LPS组、LPS+地塞米松（DXM）组、LPS+吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组及生理盐水空白对照组。采用酶联免疫吸附及原位杂交方法检测培养上清液中IFNγ、IL4及HNEC内NFкBp50mRNA的表达，凝胶电泳迁移率检测NFкBp50，观察PDTC及DXM对NFкBp50活化抑制后IFNγ和IL4蛋白水平。结果:(1)0～100μg/LLPS随浓度的增加，IFNγ分泌量增多；>

2、100μg/L后，IFNγ分泌量减少；100μg/LLPS刺激HNEC分泌IFNγ的作用最强。0～20μg/LLPS随浓度的增加，IL4分泌量增多；>20μg/L后，IFNγ分泌量减少；20μg/LLPS刺激HNEC分泌IL4的作用最强，40μg/LLPS刺激IFNγ和IL4的分泌有交叉，二者维持于一定的水平。(2)50μg/LLPS刺激HNEC后随时间延长IFNγ分泌量逐渐增加，从4h开始即有明显上升(P<0.05)，8h达到峰值；IL4随时间延长分泌量逐渐增加，从2h开始即有明显上升(P<0.05)，6h达到峰值。(3)

3、PDTC和DXM均抑制NFкBp50的表达和活性，减少HNEC分泌IFNγ和IL4,DXM4.0μg/L时,下降更明显,但高于此浓度时,不引起进一步的降低。结论:LPS对HNEC的刺激反应与浓度呈剂量依赖性，适当浓度的LPS刺激有利于HNEC分泌的Th1/Th2细胞因子维持平衡状态；过高或过低浓度的LPS刺激可诱导HNEC的Th1/Th2细胞因子失衡分泌，这可能是GNB在慢性鼻、鼻窦炎（CRS）的致病机理。【关键词】内毒素类；上皮细胞；鼻黏膜；核因子кBp50;IFNγ；白细胞介素4　　［Abstract］Objective:Tostudytheinf

4、luenceofendoutoxin(lipopolysaccharide,LPS)toexpressionofIFNγandIL4inhumannasalepithelialcell(HNEC).Methods:CulturedHNECweredividedintogroupLPS,groupDXM,andgroupPDTC,thatwereaddedwithLPS,LPSplusdexamethasone,andLPSpluspyrrolinedithiocarbamaterespectively.Ablankcontrolgroup(groupB)w

5、assetupbyaddingnormalsaline.ExpressionofIFNγandIL4insupernatantsofculturemediaandNFкBp50mRNAexpressioninHNECweredetectedwithenzymelinkedimmuneadsorption(ELISA)andhybridizationinsitu;TheactivationofNFкBp50wasdetectedbygelelectrophoresismobilityanalysis;TheproteinlevelchangesofIF

6、NγandIL4aftertheinhibitionofPDTCandDXMtoNFкBp50wasobserved.Result:LPScoulddirectlyactontheHNECtopromotethesecretionsofIFNγandIL4intermsoftime.TheLPSexcitementcouldsignificantlypromotetheactivationofNFкBp50,whichpeakedin3hoursandthenwentdown.PDTCandDXMcouldsignificantlydecrease

7、analogicallythesecretionsofIFNγandIL4andtheactivationofNFкBp50.Conclusions:TheresponseofHNECto6thestimulationofLPSshowsdosagedependence,andstimulationofLPSwithsuitableconcentrationbenefitsHNECsecretingTh1/Th2cellfactorstomaintainthebalance;ThestimulationofLPSwithtoohighandtoolowc

8、oncentrationswouldc