人核迁移蛋c刺激人造血干细胞增殖分化为巨核细胞研究

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1、人核迁移蛋C刺激人造血干细胞增殖分化为巨核细胞研究：陈彦球,葛怡琛,徐培林,杨燕【摘要】目的:研究人核迁移蛋C（hNUDC）促进人脐血的CD34+细胞增殖、分化为巨核细胞的作用。方法:使用DynalCD34体外分离系统收集人脐血CD34+细胞,无血清甲基纤维素半固体法体外培养CD34+细胞12d后,显微镜下观察hNUDC对CD34+细胞分化增殖为小、中、大巨核细胞集落的形态、数目的影响;无血清液体培养体系培养CD34+细胞10d后,流式细胞术检测hNUDC对CD34+细胞分化增殖为CD41+细胞的表达率及其DNA倍性的影响。

2、结果:hNUDC能够明显促进CD34+细胞分化增殖形成中小型CFUMK集落,可显著增加巨核细胞表面标志物CD41+的表达,CD41+细胞中DNA倍性显著地高于血小板生成素。结论:hNUDC对促进造血干细胞增殖和分化为巨核细胞具有重要作用。【关键词】人核迁移蛋白;巨核细胞;DNA倍性［Abstract］AIM:　TostudytheeffectofhumannucleardistributionC（hNUDC）onhumanmegakaryocyteproliferationanddifferentiationfromcor

3、dbloodCD34+cellsinvitro.METHODS:　HumanCD34+cellsfromumbilicalcordblood.TheCD34+cellsfreemethylcellulosesemisolidmedia,themorphologicaspectsandnumberofsmall,mediumandlargeCFUMKcoloniesicroscopyanalysis.TheCD34+cellsfreeliquidmedia,cellsovedonday10andformationofCD4

4、1+inhumanmegakaryocyteanditsDNApolyploidizationofnucleareter.RESULTS:　hNUDCsupportedtheformationofsmallandmediumCFUMKcolonyinserumfreesemisolidmedia.Furthermore,hNUDCinducedaremarkableincreaseinexpressionofthemegakaryocytecellsurfacemarkerCD41+andstimulatedtheCD4

5、1+DNApolyploidizationmoreeffectivelythanTPO.CONCLUSION:hNUDCmayplayanimportantroleinmegakaryocyteproliferationanddifferentiation.［Keybopoietin,TPO）在体外具有调节巨核细胞增殖、成熟和血小板形成的功能［1］。但研究发现TPO基因敲除小鼠的血小板计数虽然比正常小鼠降低了85%,但这些小鼠并没有发生出血现象,仍具有形态正常的巨核细胞和血小板［2］。因此推测,很可能存在有其他因子,与TPO

6、一起参与巨核细胞和血小板生成的调控过程。核迁移蛋白C(nucleardistributionC,NUDC)在核迁移中起着关键的作用,NUDC与其家族成员相互作用［3］,和微管一起参与细胞增殖［4］、正常的造血、神经迁移和脑发育。在增生的细胞中可以观察到NUDC强烈的免疫标记,NUDC的水平在红系祖细胞中最高,在正常人骨髓中,早期骨髓祖细胞和红系祖细胞中,人核迁移蛋白C（hNUDC）和mRNA有高水平表达。我们使用重组hNUDC蛋白,成功制备了hNUDC单克隆抗体（mAb）,前期实验结果表明,hNUDC蛋白呈点状分布于人巨核细

7、胞、巨核系白血病细胞株Meg01、Dami的细胞膜与细胞核中,而且hNUDC可以特异地与血小板生成素受体（Myeloproliferativeleukemia,Mpl）特异地结合,对于小鼠的巨核细胞系和血小板的生成,具有与TPO类似的生物活性［5］;表明hNUDC很有可能是巨核细胞增殖分化调控中一个重要的因子。为进一步确证并检测hNUDC蛋白是否具有参与巨核细胞和血小板生成调控的生物活性,我们选择正常人脐带血的造血干细胞,在体外实验观察hNUDC对造血干细胞增殖、分化的作用,为脐血巨核系定向扩增的基础研究和临床应用摸索条件

8、,提供新的研究思路。1材料和方法1.1材料DynalCD34祖细胞分选系统购自DynalBiotech公司;造血干细胞无血清培养液StemSpanH2000购自StemCellTechnologies公司;淋巴细胞分离液购自AmershamBiosciences公司;IMDM(Iscove