基质金属蛋白酶2及其抑制因子timp2在脑胶质瘤中的表达及意义

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1、基质金属蛋白酶2及其抑制因子TIMP2在脑胶质瘤中的表达及意义【关键词】基质金属蛋白酶；基质金属蛋白酶抑制因子；神经胶质瘤　　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheexpressionofmatrixmetalloproteinase2(MMP2)anditsinhibitortissueinhibitorofmetalloproteinase2(TIMP2)andtheirrelationaofdifferentmalignancydegree.MethodsImmun

2、ohistochemicalSPmethodployedtoexaminethelevelofMMP2andTIMP2insurgicalsamplesfrom67patientssufferingfromgliomasand10patientsa.ResultsAsthetumorsmalignancydegreeincreased,theexpressionofMMP2increasedbuttheexpressionofTIMP2decreasedasthetumormalignancyd

3、egreeincreased.ConclusionMMP2andTIMP2haveagreatsignificanceinevaluatingthemalignancydegreeofhumangliomas.　　KEYMP2);tissueinhibitorofmetalloproteinase2(TIMP2);glioma　　人脑胶质瘤是危害人类健康的常见恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的40%-50%。目前，以手术治疗为主辅以放疗、化疗的综合治疗总体疗效欠佳，而造成这一现象的一个重要原因就是胶质瘤所

4、具有的侵袭性生长特性[1]。　　目前，认为在脑胶质瘤侵袭性生长过程中，起关键作用的是一类基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)。MMPs在人体内表达的水平及其活性受诸多因子的调节，特别与其特异性组织抑制剂(tissueinhibitorofmetalloproteinase,TIMPs)关系密切，可以说MMPs与TIMPs在人脑胶质瘤中表达情况直接关系到胶质瘤侵袭性的强弱。本研究采用免疫组化的方法，检测了人脑胶质瘤中MMP2和TIMP2蛋白表达情况，并探讨其与胶质

5、瘤恶性程度之间的关系。　　1资料与方法　　1.1临床资料　　本组67例神经胶质瘤标本均为2004年至2006年我院手术切除的石蜡包埋标本(观察组)。其中男40例，女27例；年龄20-69岁，平均(43.07±7.23)岁。患者术前均未行放、化疗。全部脑胶质瘤组织均经病理组织学检查明确诊断。根据MP2、TIMP2一抗均购自Maixinbio公司；SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂、多聚赖氨酸等购自武汉博士得生物公司；主要仪器有水浴锅、微波炉、显微镜等。　　1.3MMP2、TIMP2蛋白的检测　　采用免

6、疫组化SP法。肿瘤标本常规二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水后以3%(体积分数)H2O2、37℃孵育10min，PBS冲洗2-3次各5min；然后将标本置于0.01mol/L枸橼酸缓冲液中行抗原修复，在正常羊血清工作液封闭10min后倾去血清，滴加鼠抗人MMP2和TIMP2一抗，4℃冰箱孵育过夜；PBS冲洗5min后滴加生物素标记二抗，孵育30min后以PBS冲洗；最后滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS冲洗3次各5min，DAB反应显色后自来水充分冲洗、苏木素复染。常规行脱

7、水、透明、干燥封片后镜下观察。用已知MMP2、TIMP2表达阳性的切片作阳性对照，PBS代替一抗孵育已知阳性的切片作阴性对照。　　1.4结果判定标准　　MMP2和TIMP2蛋白染色主要位于胞质，极少数有胞核着色，光镜下呈棕黄或棕褐色。每张切片高倍镜下(×400)随机观察5个视野，对染色阳性细胞计数。阳性细胞占总细胞的比率<10%为“-”，10%-25%为“+”，25%-50%为“”，>50%为“”。　　1.5统计学处理　　应用SPSS12.0统计软件分析数据。组间比较采用χ2检验，

8、相关性检验采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。　　2结果　　2.1MMP2在脑胶质瘤中的表达　　SP免疫组化显示，正常脑组织中少有MMP2表达，而胶质瘤中MMP2在胞核、胞质中均有表达，以胞质为主(图1)。两组MMP2阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。且MMP2的阳性率随着肿瘤级别的增高而增高，Ⅰ、Ⅱ级同Ⅲ、Ⅳ级相比差异有统计学意义(P<0.05)；Ⅰ、Ⅱ级