免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的b细胞活化机制

《免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的b细胞活化机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的B细胞活化机制：王蓉,杨欢,肖波,张丽芳【摘要】　　目的:检测脾脏和淋巴结中B细胞活化相关蛋白表达及蛋白磷酸化表达水平的变化,从B细胞活化的角度探讨Tα146162iMDC干预实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG的作用机制。方法:采用树突状细胞(DC)负载Tα146162干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠（EAMG）的发病,34只6～8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为模型组（A）、干预组（B）和对照组（C）。体外培养DC,然后负载Tα146162进行干预。从初次免疫起至第9

2、0天实验终止前,行EAMG严重性临床评估及发病率的计算。DC干预,能显著降低EAMG的发病率,改善临床症状,其机制可能与抑制B细胞活化有关。【关键词】实验性自身免疫性重症肌无力;Tα146162;未成熟髓源性树突状细胞;B细胞　　［Abstract］AIM:ToexplorethetherapiceffectofTα146162iMDCsinC57BL/6miceentalautoimmunemyastheniagraves(EAMG),andillustratealeC57BL/6micelydividedintoEAMG

3、groups(A),thepreventiongroup(B)andcontrolgroup(C);ImmaturebonemarroeasuredbyDCscanpreventEAMGandprobablyameliorateEAMGbythenegativeregulationonBCRsignaling.　　［Keyentaleutoimmunemyastheniagraves;Tα146162;immaturebonemarroentalautoimmunemyastheniagraves,EAMG）是重症肌无力（mya

4、stheniagraves,MG）经典的动物模型。B细胞活化在MG/EAMG发病中是必不可少的。B细胞抗原受体（Bcellantigenreceptor,BCR）,简称B细胞受体是B细胞表面标志性分子之一,参与了抗原的加工处理、细胞凋亡、细胞发育以及增生等过程,对B细胞的产生、选择和活化具有关键作用［1］。已发现未成熟髓树突状细胞（immaturebonemarro公司）,LeuGlyIleTrpThrTyrAspGlyThrLysValSerIleSerProGluSer,纯度（HPLC）≥95%

5、（52968,GLS）,-80℃保存备用。兔抗小鼠Btk抗体、兔抗小鼠Syk抗体、兔抗小鼠Lyn抗体、兔抗小鼠PLCγ2抗体和HRPpTyr小鼠单克隆抗体（mAb）购自加拿大SantaCruz公司。　　1.2实验动物处理与分组34只近交系无特定病原体（SPF）级6～8周健康雄性C57BL/6J小鼠,质量20～24g;15只SPF级4～6周健康雄性C57BL/6J小鼠,质量18～22g,由中南大学实验动物中心从上海斯莱克斯实验动物有限公司购入。应用SPSS13.0随机数字表,将34只6～8周C57BL/6J小鼠分为3组:模型组

6、（A组）:实验0d、30d、60d连续3次以TAChR抗原乳剂200μL（20μgTAChR、100μLCFA、100μLPBS）皮下注射小鼠的双肩及后足垫,每个部位50μL免疫动物,诱导EAMG发作;干预组（B组）:实验0d、30d、60d连续3次以TAChR抗原乳剂免疫动物,3d、33d、63d分别以负载Tα146～162（50mg/L）的iMDCs干预;对照组（C组）:实验0d、30d、60d连续3次予CFA+PBS皮下注射,3d、33d、63d予1mLPBS皮下注射。按Berman等［3］评分标准做EAMG严重性的临

7、床评估,评分1分以上者进行发病率的计算。15只4～6周C57BL/6J小鼠用途为取DCs,不参与分组。　　1.3DC的培养参照胡珏等［2］方法提取骨髓并诱导DC分化。DC表型分析:收集培养的DC,用PBS重新将细胞制成悬浮液并调整细胞密度为1×109/L,台盼蓝染色细胞活力>95%,加入试管,分别加入荧光抗体标记抗体CD11C、CD40、CD86和MHCII,4℃孵育30min,PBS洗涤2次,以荧光标记的同型Ig作对照,流式细胞仪（FACScaliber,BD公司）检测,CellQuest软件分析。　　1.4annGg

8、roup;2:Treatmentgroup;3:Controlgroup;4-6:Lymphonode.4:EAMGgroup;5:Treatmentgroup;6:Controlgroup.　　2.5各组小鼠脾脏和淋巴结Lyn蛋白及磷酸化表达水平